水样品SPE的方法选择
分子极性
• 对于非离子分析物,或处于电中性状态的可离子化分析物,分子极性将决定其在反相吸附剂上的保留效果。
• 对于水样品,水是极性的,在水中溶解度高的分析物,极性也强。
• 选择方法前,首先可获取分析物的中水溶解度数据,以判断分析物极性。
• 根据经验,水中溶解度小于1000mg/L的溶质具有中等或弱极性,用反相硅胶吸附剂如C18是效果很好的。
• 如果水中溶解度大于1000mg/L,极性为中等或较强,推荐用石墨化炭和SDB(styrene-divinylbenzene)吸附剂,因为它们的容量远大于C18。
非极性分析物
例如:水中多环芳烃SPE回收率
可见,水样中加入甲醇使其回收率明显提高。主要原因之一,是甲醇的加入降低了分析物在容器(和管路)内壁上的吸附。
弱极性非离子分析物
• 水样品中,中等极性非离子分析物的SPE相对简单,即使很少甚至不加入有机溶剂也可顺利得到较好的回收率。
• 例如,水中毒死蜱,C18盘47mm,用丙酮-甲醇-水活化,上样1L水(0.05%甲醇),丙酮-正己烷洗脱,经脱水、浓缩,GC-ECD检测,回收率93%。
极性非离子分析物——离子强度
• 水样品中加入盐,通常为NaCl,0-3.5%,有时可加至饱和(35%),会提高水样中离子强度,促进有机分析物向反相吸附剂上的分配。
中等极性可电离分析物——水中的电离平衡
• 当可离子化的分析物在水中存在以下电离平衡时,
HA=H+A
• 根据Henderson-Hasselbach方程
pH=pKa+logA/HA
——式中,A是共轭酸HA的共轭碱。
• 当pH=pKa时,=
• 当pH比pKa大2个单位时,A形态占约99%
• 当pH比pKa小2个单位时,HA形态占约99%
• 对于有机酸:A是带负电荷的离子,HA形态在反相吸附剂上保留较强
• 对于有机碱:A是不带电荷的分子,A形态在反相吸附剂上保留较强
• 因此,对于反相SPE系统,适当的pH对可离子化分析物的萃取效果非常关键
反相SPE中,应获得 分析物pKa值,并将 pH调节至与pKa相差2个单位以上,且使分子呈中性。
极性可电离分析物
• 如果通过调pH值使分子呈中性后,分子极性仍然较强,则需要使用离子交换模式SPE。可根据分析物特点选择以下方式——
• 需要注意的是,离子交换对样品流速敏感,应使水样通过SPE介质速度尽量慢且稳定。
同时具有正负电荷的可电离分析物——药品
• 这时我们使用的是LabtechPLS或WatersOasisHLB,亲脂亲水平衡型吸附剂。
• 例如,
•水中头孢克洛抗生素的SPE-HPLC测定。
•200mL水样中加入100mgEDTA-Na2,混匀。
•调节pH=2.0,平衡30min。
•HLB小柱,甲醇-水-酸性水活化;
•上样;
•酸性水淋洗EDTA-Na2;
•甲醇洗脱。
•浓缩后,HPLC测定。
•回收率102.3%
洗脱
• 水样经过吸附剂后,水会吸附于吸附剂表面,如不除去,将影响非极性有机溶剂(后续为GC检测)的洗脱。可采取两种方式——