主题：【原创】GB 5009.82-2016 食品中维生素E的分析

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发表于：2017/11/06 22:18:55 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

维生素E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是最主要的抗氧化剂之一。维生素E具有促进生育功能和抗氧化功能，是食品中广泛应用的抗氧化剂和营养剂。GB 5009.82-2016 食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定》就规定了维生素E的分析方法，包括α, β, γ, δ四种维生素E异构体的分析方法。标准中列出了反相色谱法和正相色谱法两种方法分析维生素E，这里给大家分别介绍。
一、反相色谱法：
国标规定的条件：

国标中推荐使用的是3um的C30色谱柱，有些做叶黄素或者胡萝卜素的同学为了方便就直接使用5um的C30柱做维生素E的分析，有些同学严格按照国标方法，使用3um的C30柱，这里分别介绍安谱的两款C30柱分析维生素E的情况。
（1）5umC30柱
分析条件：
色谱柱：Athena C30 液相色谱柱 4.6 x 250mm，5μm（LAEQ-462552）
流速：0.8ml/min
柱温：20℃
进样量：10ul
检测器：UV，294nm
流动相：A: 甲醇 B: 水

时间（min）	流速	水%	甲醇%
0.0	0.8	4	96
12.0	0.8	4	96
12.5	1.0	4	96
17.0	1.0	0	100
30.0	1.0	0	100
31.0	0.8	4	96
33.0	0.8	4	96

谱图：

反相分析四种VE难点就是β-生育酚和γ-生育酚两种异构体的分离，使用5um的C30多次调整流动相条件，最终得出上图的分离效果，二者的分离度可以达到1.46左右，也还能接受，但是要想达到更好的分离效果还是要用3um的C30柱。
（2）3umC30柱
分析条件：
色谱柱：Athena C30 液相色谱柱 4.6 x 250mm，3μm（LAEQ-462553）
流速：0.8ml/min
柱温：20℃
进样量：10ul
检测器：UV，294nm
流动相：100% 甲醇
谱图：

β-生育酚和γ-生育酚两种异构体的分离度达到1.9以上，达到了基线分离，流动相使用纯甲醇，等度洗脱，相较于国标方法，更简单，更省事，有木有
柱温的影响
细心的同学可以发现，C30柱分离维生素E柱温必须在20℃左右，为什么呢？这里用3um的C30柱分别在15、20、25、30℃柱温下分离4种维生素E，考察一下柱温对C30柱分析维生素E的影响，结果如下：

R代表β-生育酚和γ-生育酚的分离度，可以看出，随着柱温升高，二者的分离度明显下降，所以同学们要注意柱温哦
二、正相色谱法：

手中没有国标推荐的那款酰胺基柱，但是咱有物美价廉的硅胶柱啊，效果也是杠杠的，不信，你看：
分析条件：
色谱柱：Athena Silica 4.6*250mm，5um （LAEQ-462576）
流动相：正己烷：1,4-二噁烷（95:5）
流速： 0.8mL/min
柱温： 30℃
紫外检测器：294nm
进样量：10ul
谱图：

4种维生素E异构体峰型良好，β-生育酚和γ-生育酚的分离度达到2.8，完全符合国标要求。
两种分析方法都已介绍完毕，反相方法5um和3um的Athena C30柱都可以分离4种维生素E，3um的分析条件更简单，分离度更好；正相方法，Athena Silica柱也能完美分离四种维生素，并且比酰胺柱更经济实惠，希望可以给大家作为参考。