维生素E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是最主要的抗氧化剂之一。维生素E具有促进生育功能和抗氧化功能,是食品中广泛应用的抗氧化剂和营养剂。GB 5009.82-2016 食品安全国家标准 食品中维生素A、D、E的测定》就规定了维生素E的分析方法,包括α, β, γ, δ四种维生素E异构体的分析方法。标准中列出了反相色谱法和正相色谱法两种方法分析维生素E,这里给大家分别介绍。
一、反相色谱法:国标规定的条件:
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国标中推荐使用的是3um的C30色谱柱,有些做叶黄素或者胡萝卜素的同学为了方便就直接使用5um的C30柱做维生素E的分析,有些同学严格按照国标方法,使用3um的C30柱,这里分别介绍安谱的两款C30柱分析维生素E的情况。
(1)5umC30柱
分析条件:
色谱柱:Athena C30 液相色谱柱 4.6 x 250mm,5μm(LAEQ-462552)流速:0.8ml/min
柱温:20℃
进样量:10ul
检测器:UV,294nm
流动相:A: 甲醇 B: 水
时间(min) | 流速 | 水% | 甲醇% |
0.0 | 0.8 | 4 | 96 |
12.0 | 0.8 | 4 | 96 |
12.5 | 1.0 | 4 | 96 |
17.0 | 1.0 | 0 | 100 |
30.0 | 1.0 | 0 | 100 |
31.0 | 0.8 | 4 | 96 |
33.0 | 0.8 | 4 | 96 |
谱图:
反相分析四种VE难点就是β-生育酚和γ-生育酚两种异构体的分离,使用5um的C30多次调整流动相条件,最终得出上图的分离效果,二者的分离度可以达到1.46左右,也还能接受,但是要想达到更好的分离效果还是要用3um的C30柱。
(2)3umC30柱
分析条件:
色谱柱:Athena C30 液相色谱柱 4.6 x 250mm,3μm(LAEQ-462553)流速:0.8ml/min
柱温:20℃
进样量:10ul
检测器:UV,294nm
流动相:100% 甲醇
谱图:
β-生育酚和γ-生育酚两种异构体的分离度达到1.9以上,达到了基线分离,流动相使用纯甲醇,等度洗脱,相较于国标方法,更简单,更省事,有木有
柱温的影响细心的同学可以发现,C30柱分离维生素E柱温必须在20℃左右,为什么呢?这里用3um的C30柱分别在15、20、25、30℃柱温下分离4种维生素E,考察一下柱温对C30柱分析维生素E的影响,结果如下:
R代表β-生育酚和γ-生育酚的分离度,可以看出,随着柱温升高,二者的分离度明显下降,所以同学们要注意柱温哦
二、正相色谱法:
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手中没有国标推荐的那款酰胺基柱,但是咱有物美价廉的硅胶柱啊,效果也是杠杠的,不信,你看:
分析条件:
色谱柱:Athena Silica 4.6*250mm,5um (LAEQ-462576)流动相:正己烷:1,4-二噁烷(95:5)
流速: 0.8mL/min
柱温: 30℃
紫外检测器:294nm
进样量:10ul
谱图:
4种维生素E异构体峰型良好,β-生育酚和γ-生育酚的分离度达到2.8,完全符合国标要求。
两种分析方法都已介绍完毕,反相方法5um和3um的Athena C30柱都可以分离4种维生素E,3um的分析条件更简单,分离度更好;正相方法,Athena Silica柱也能完美分离四种维生素,并且比酰胺柱更经济实惠,希望可以给大家作为参考。