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主题：【求助】waters2695-2475检测谷氨酸跑不出峰

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sunely
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发表于：2018/01/18 10:40:42 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问各位大神，我现在在做HPLC检测大鼠脑中谷氨酸、GABA的含量，用的高效液相色谱仪是waters2695，衍生试剂也是OPA，流动相A是50mmol/L的醋酸钠溶液（ph6.5），流动相B是乙腈，激发波长340，发射波长455，但是检测的时候谷氨酸标准品跑出来的色谱图只有溶剂峰，GABA标准品就能跑出来，两种标准品的溶剂一样是50%乙醇，请问有人知道这是怎么回事吗？
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2018/1/18 11:49:26 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
衍生问题吧，可能谷氨酸钠没有发生衍生，走单标试试，看能否出峰
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2018/1/18 11:49:55 Last edit by bingwang228
有水有渝
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2018/1/18 11:56:11 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
肯定是没有衍生好了。衍生方法来源哪里，方便的话还是发上来看一下。
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sunely
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2018/1/18 14:27:03 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
衍生问题吧，可能谷氨酸钠没有发生衍生，走单标试试，看能否出峰
测的就是单标
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sunely
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2018/1/18 15:23:33 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
肯定是没有衍生好了。衍生方法来源哪里，方便的话还是发上来看一下。


衍生试剂：5mgOPA溶于500ul甲醇，加入50ulβ巯基乙醇，最后加入1ml 0.05mol pH=9.5的四硼酸钠溶液。
衍生化过程：取100ul谷氨酸标准品溶液（1mg/ml），加入100ul衍生试剂，衍生2min，进样检测。
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有水有渝
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2018/1/18 16:42:42 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
衍生温度有没有要求，适当延长衍生时间试试。
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夏天的雪
bingwang228
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2018/1/22 11:25:37 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sunely(Ins_39a1228b) 发表:
测的就是单标
那极有可能是衍生的问题了，看一下衍生条件吧
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