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耗材和试剂的验收之培养基
耗材和试剂如果在一定程度上影响实验室检测数据的质量情况下,我们要对其进行识别,不仅仅做符合性验收,还要根据其特性,做相应的技术性验收,本文依据GB 4789.28—2013.食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 SN/T1538.1-2005.培养基制备指南 第1部分:实验室培养基制备质量保证通则
.SN/T1538.2-2007.培养基制备指南 第2部分:培养基性能测实用指南,为培养基的验收提供指导。
符合性验收:购买培养基到货后,由试剂管理员和微生物检测人员共同核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求,同时应填写“培养基验收检查记录单”验收符合要求后,交由检测人员接受保管,填写培养基入库记录和建立试剂台帐。
技术性验收之前需要制备培养基,小心称量所需量的脱水合成培养基(必要时佩戴口罩或在通风柜中操作,以防吸入含有有毒物质 的培养基粉末),先加入适量的水,充分混合(注意避免培养基结块),然后加水至所需的量后适当加热,并重复或连续搅拌使其快速分散,必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟。湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行,高压灭菌一般采用121 ℃±3 ℃灭菌15 min,具体培养 基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。
应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行检查,尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进 行检查。
在初次使用每批培养基时,均需随同检测配制一个测试培养基,在灭菌或消毒后应在25℃温度下采用精密PH 试纸测试PH值,并判断是否符合要求。
购置的同一批次培养基其质量检查应能通过无菌检查(制备好的培养基经30~35℃培养48小时,真菌培养基经20~25℃培养72小时候后,应无菌生长)、新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试,经检查合格的该批次培养基方准许使用,否则不准使用,做好检查记录。
新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试,包括物理指标和微生物指标的测试,根据测试结果及时填写“实验室培养基质量控制性能测试记录及评估报告”
物理指标控制
1)测试20℃~25℃的pH值
2)琼脂层厚度;色泽;透明度和(或)是否存在肉眼可见杂质。
微生物学指标控制
可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法(参考SN/T 1538.2-2016《培养基制备指南 第2部分:培养基性能测试实用指南》和GB 4789.28—2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》)对培养基性能进行测试,具体操作方法如下:
(1)生长率
将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中,每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。
1)定量方法
生长率PR的计算: PR = NS/NO
NS:从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。
N0:从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数(该菌落总数应≥100cfu )。
要求:非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.7,该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1;每平板(或每试管)的接种水平为10CFU~100CFU。
2) 半定量方法
半定量方法采用生态测量技术在平板上划线,平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G,G值不应超过标准规定的允许范围。
3) 定性方法
定性方法采用划线法观察。
①选择性
将浓度为104CFU/mL~106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中,培养基的选择性应达到规定值。
②定量方法
选择因子SF: SF = DO - DS
DO:能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度
DS:能在测试培养基上显示生长的最高稀释度
要求:非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2 ;半定量和定量法中,非目标菌应部分或全部被抑制。
③生理生化特性(选择性和特异性)
规定培养基的基本特性,使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性(菌落形态、大小等)和非目标菌的被抑制程度进行测试。
(2)性能评价和结果解释
按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定,则该批培养基品质优良;若只有物理指标和微生物指标符合规定,则该批培养基可被接收。
综上所述,培养基在微生物实验室有着很重要的作用,其质量能够影响整个微生物检测过程,所以在其购置回来后,应该进行技术性验收,在使用过程中,也应注意存储条件和有效期,避免发生异常情况,导致检测结果出错。