目的：测定白芍提取物抗氧化的活性。

方法：采用分光光度法对白芍提取物总抗氧化活性进行测定，使用754分光光度计，在520nm处测定其吸光度。

结果：白芍提取物具有抗氧化活性，其抗氧化活性大小与浓度具有明显的关系。

结论：分光光度法测定白芍提取物抗氧化活性稳定可行，简便，可作为白芍提取物的抗氧化测定标准之一。

白芍系毛莨科芍药植物( Paeonia lactiflora Pall.)的去皮干燥根，性微苦，味苦酸。有养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗的功能。我国白芍主产为浙江、安徽、四川等地。其化学成分主要为挥发油类、单萜类、三萜类及黄酮类化合物等。白芍具有抗凝血作用，能有效清除血管内皮过氧化物，能够明显改善由高胆固醇血症引起的血管内皮细胞的功能下降。可治疗胸腹胁肋疼痛，泻痢腹痛，自汗盗汗，阴虚发热，月经不调，崩漏，带下。中医认为白芍归肝、脾经,有养血、柔肝、疏肝的作用。

近年来的研究证实，人体内自由基增多导致的脂质过氧化作用与多种疾病有关。因此，对抗氧化药物的研究已成为自由基医学研究领域中的一个重要课题。测定样品的总抗氧化能力(total antioxidant capacity，TAC)或总清除自由基抗氧化力(total radical-trap pingantioxidative capacity， TRAC)激起了许多学者的兴趣。我国有丰富的植物资源，植物中酚类、黄酮类、萜类和多种提取的抗氧化活性物质的研究越来越受到关注，并且在衰老的自由基学说以及与衰老相关的疾病研究中，抗氧化活性物质的研究也占有很重要的地位。

本文采用分光光度法对白芍提取物总抗氧化活性进行测定，以没食子酸标准品为对照，为白芍的进一步研究和应用提供依据。

1 仪器和材料

1.1 仪器 UV–754N型分光光度计（上海天普）；

分析天平（TG-328A，上海天平仪器厂）；恒温鼓风干燥箱（DHG-9070AS，深圳亿博兰电子有限公司）；电热套；恒温水浴箱。

1.2 材料白芍（安徽，121001）购于哈药世一堂。

1.3 试剂总抗氧化能力测定试剂盒（研域化学试剂有限公司)，没食子酸标准品(121131)。

其余试剂：双蒸水。

2 实验方法

2.1 白芍提取物的制备称取白芍50克，水浴回流提取两次：第一次加8倍量水浸泡2小时，微沸40分钟；过滤，第二次加6倍量水，微沸30分钟。合并两次提取液，减压浓缩定容至50.0ml，制得含生药1 g·mL^-1的白芍提取液备用。

2.2 提取物抗氧化能力测定抗氧化能力测定原理:生物体中有许多抗氧化物质，能使Fe³⁺还原成Fe²⁺。后者可与啡啉类物质形成稳定的螯合物，通过分光光度法可测出其抗氧化能力的高低。

2.2.1 试剂的配制依照总抗氧化能力测定的试剂盒说明书配制试剂一至试剂四备用。

2.2.2 没食子酸标准品抗氧化能力的测定依照总抗氧化能力测定的试剂盒说明书进行操作，配置不同浓度的没食子酸溶液，采用754分光光度计于520nm测定吸光度，选取适宜吸光度值及此吸光度下的溶液浓度备用。

2.2.3 白芍提取物抗氧化能力的测定依照总抗氧化能力测定的试剂盒说明书进行操作，加入不同体积白芍提取液，采用754分光光度计于520nm测定吸光度，评价白芍提取物的抗氧化活性（见表1）。

表1中，加入待测样本和蒸馏水后充分混匀，38℃水浴40min。

加入试剂四后充分混匀，放置10min，空白管调零，1cm光径，520nm处测各管吸光度。

3 方法学考察

3.1 精密度试验取同一浓度没食子酸溶液5份依照上述方法平行测定，记录吸光度值，计算总抗氧化能力及其RSD，考察该显色方法精密度。

3.2 稳定性试验取同一没食子酸溶液，加入各试剂显色后使用754分光光度计每隔1min测定1次，共测定5min，记录吸光度值，计算总抗氧化能力及其RSD，考察该显色方法稳定性。

结果

1 没食子酸标准系列浓度及总抗氧化能力见表2.

各组与1组进行t检验，均存在显著性差异。可知，随加入浓度增加，没食子酸抗氧化活性逐渐升高。

2 白芍提取物总抗氧化能力见表3。

各组与4组进行t检验，1，2组与4组均存在显著性差异，3组与4组不存在显著性差异。可知随加入体积的增加，白芍提取液总抗氧化能力首先降低而后达到平衡。

3 精密度实验选取没食子酸溶液浓度为1.2mg·mL^-1，依上述方法平行测定5次，记录吸光度，计算总抗氧化能力及其RSD，统计分析结果（见表4）。

由表4可知，实验结果抗氧化平均值为291±6，RSD为2%(n=5)，表明实验方法精密度良好。

4 稳定性试验选取没食子酸溶液浓度为1.4mg·mL^-1，依上述方法测定后记录吸光度，计算总抗氧化能力及其RSD，统计分析结果（见表5）。

从表5可知，实验结果抗氧化平均值为350±1，RSD为0.4%(n=5)，表明实验方法稳定性良好。

附表

表１总抗氧化能力的研究方法

表2标准系列浓度及总抗氧化能力（n=3）

*P＜0.01，vs group1

表3白芍提取物总抗氧化能力（n=3）

*P＜0.05，vs group4

表4 精密度实验结果(n=4)

表5稳定性实验结果(n=5)

讨论

1 机体内的自由基虽不断地产生，同时也不断地被清除，从而保证体内各种自由基的浓度维持在一个对机体有利的生理性低水平。但是，当某种因素使体内自由基产生过多或清除能力降低时，过多的自由基将会对机体造成一系列损害，加速机体的衰老过程并诱发各种疾病,本实验为白芍的抗氧化作用提供了一定依据,为进一步研究奠定了基础。

2 羟自由基，超氧自由基，DPPH均可用于中药抗氧化活性的测定，此三种方法均稳定、可行。考虑到总抗氧化能力测定试剂盒操作简便可行，故本文应用总抗氧化能力的试剂盒测定白芍提取物的抗氧化活性。

3 在本实验的基础上可进一步分离抗氧化有效成分，测定其单体抗氧化活性。

4 在本实验测定浓度范围内可知随浓度的增加，白芍提取物抗氧化活性首先降低而后达到平衡。其他浓度下白芍提取物的抗氧化活性有待于进一步探索。其抗氧化机制有待于进一步研究。

5 该方法简便、可行，可用作为白芍抗氧化活性测定标准之一。

结论

1 本实验以水为溶剂对白芍进行提取，具有溶剂无毒、廉价的优点。

2 本实验采用分光光度法测定白芍提取物抗氧化活性，该法简便、快速，精密度稳定性良好，测定结果准确，可为白芍的临床应用提供参考.

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