主题：【第十一届原创】水产品中硝基呋喃类药物残留的检测

                                                              水产品中硝基呋喃类药物残留的检测
检测项目：呋喃唑酮代谢物（AOZ）、呋喃西林代谢物（SEM）、呋喃妥因代谢物（AHD）、呋喃它酮（AMOZ）代谢物
适用基质：动物源性样品
定量下限：0.5μg/kg；检验依据：GB/T 20752-2006、GB/T 21311-2007、农业部783号公告-1-2006
试剂配制：0.2mol/L盐酸：66mL盐酸加去离子水稀释至4L；
0.3%2-NBA溶液：0.03g邻硝基苯甲醛溶解于10mL乙腈中；
8%磷酸氢二钠：称取40g磷酸氢二钠，纯水定容至500mL；
4%NaOH：称取20gNaOH，纯水定容至500mL；
乙腈水（1+9）：100mL乙腈与900mL超纯水混匀备用；
乙腈饱和正己烷：乙腈与正己烷等比例混合，取上层；
标准工作溶液：取1.0μg/mL标准中间液0.5mL，用乙腈定容至50mL，混匀，浓度为0.01μg/mL（该溶液临用现配）；
内标标准工作溶液：取1.0μg/mL内标标准中间液0.5mL，用乙腈定容至10mL，混匀，浓度为0.05μg/mL（该溶液临用现配）；
标准曲线配制：分别移取0.1、0.2、0.4、1.0mL 0.01μg/mL混合标准溶液至样品中，相当于0.5、1.0、2.0、5.0μg/kg添加水平。
仪器条件：液相色谱仪  Agilent 1200-6410B；色谱柱：菲罗门 kinetex C18柱（100×2.1mm 2.6um）
流速：0.25mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；
流动相：A：乙酸铵甲酸水（0.5ml甲酸+0.168g乙酸铵→500ml纯水稀释）；B：乙腈    梯度洗脱
Iron Source：ESI+；检测方式：MRM多反应监测

样品前处理：  称取2.00g（精确至0.01g）样品于50mL离心管中，加入甲醇水洗涤^]，弃去洗涤液，振荡10min后，以4000r/min离心5min，弃去液体。残渣中加入0.2 mol/L盐酸15mL和0.3%2-NBA溶液1.0mL^[2]、10ng/mL内标溶液1.0mL（加标最终溶液浓度5ng/ml），充分涡旋摇匀，在37℃下恒温振荡16h。取出适当冷却后，加入8%磷酸氢二钠4mL，4%NaOH溶液约2.4mL，调节pH至7.0~7.5，加入20mL乙酸乙酯，加盖振荡3min，在4000r/min 离心5min，将上清液吸取到150mL鸡心瓶中，40℃下减压旋转蒸发至干，后用2mL乙腈水（1+9）溶液和2mL乙腈饱和正己烷洗脱，洗脱液于10000 r/min高速离心分层，取下层清液用0.22μm微孔滤膜过滤，上机测试。

标液图谱

样品测定：





总结：与标准方法不同有：1、GB/T 20752-2006、农业部783号公告-1-2006方法中的衍生剂均用二甲亚砜溶解，GB/T 21311-2007用甲醇溶解，流程用乙腈溶解，可降低SEM假阳性的几率。2、本方法和GB方法中调pH7.0~7.5时用缓冲盐体系，更有利于调酸。3、GB/T 21311-2007用10~20mL乙酸乙酯萃取2次，萃取液浓缩后用正己烷除油；GB/T 20752-2006 方法中使用HLB固相萃取柱净化；农业部783号公告-1-2006方法用4ml乙酸乙酯萃取2次，氮吹浓缩；本流程直接用20mL乙酸乙酯萃取一遍后高速离心取此层浓缩。

GB/T 20752-2006方法试样要先用15mL甲醇水（2+1）均质洗涤；GB/T 21311-2007方法试样要先用10ml甲醇水（1+1）均质洗涤。
衍生剂用乙腈溶解，可降低SEM假阳性的几率，不可使用丙酮溶解。加入盐酸是为了使代谢物水解，水解后才与衍生剂反应。盐酸加入量保持一致，可方便后调pH值步骤。