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不知怎么回事,文件一伟上来图不见了。只好图单另上图,格式不会调。将就这样吧
小白的LC(液相色谱)之旅——流动相
有段时间被“发配”搞
液相色谱。Agilent的1260infinity设备放置较久。作为小白,没有师傅的情况下,没人可以请教,只能借助仪器信息网搜寻相关学习资料。粗略学习一下,归根到底还是要实践。其中一个问题就是流动相了。原先一直使用的水甲醇流动相。摸索了一下不同比例配比下压力的变化,不同波长检测时峰面积和峰高有何不同。之后发现别人都用的水乙腈流动相。于是又改用水乙腈流动相。再来一遍。发现二者还是有些稍微不同。还是用数据说话。并将一些关键之处及自己的体会心得记录下来。
1. 压力VS不同配比流动相
表1 压力VS不同配比水甲醇流动相
No. | A% | C% | Pressure(bar) |
1 | 0 | 100 | 39 |
2 | 10 | 90 | 60 |
3 | 20 | 80 | 78 |
4 | 30 | 70 | 94 |
5 | 40 | 60 | 106 |
6 | 50 | 50 | 113 |
7 | 60 | 40 | 113 |
8 | 70 | 30 | 106 |
9 | 80 | 20 | 93 |
10 | 90 | 10 | 78 |
11 | 50 | 50 | 113 |
图1压力VS不同配比水甲醇流动相
表2压力VS不同配比水乙腈流动相
No. | A% | C% | Pressure(bar) |
1 | 50 | 50 | 60 |
2 | 60 | 40 | 67 |
3 | 70 | 30 | 72 |
4 | 80 | 20 | 75 |
5 | 90 | 10 | 74 |
6 | 40 | 60 | 51 |
7 | 30 | 70 | 42 |
8 | 20 | 80 | 35 |
9 | 10 | 90 | 28 |
10 | 0 | 100 | 23 |
11 | 50 | 50 | 56 |
12 | 60 | 40 | 63 |
13 | 70 | 30 | 67 |
14 | 80 | 20 | 70 |
15 | 90 | 10 | 69 |
16 | 50 | 50 | 57 |
图2压力VS不同配比水乙腈流动相
从压力随流动相配比不同而不同,在水甲醇流动相中当水与甲醇各50%时压力达最大。而在水乙腈流动相中当乙腈比例为100%时压力最小。水比例越大压力越大,因流动相不可以全是水。可见乙腈与甲醇的流动阻力不同。为节省试剂,水乙腈流动相取中间各50%的比例。
2.波长的选择
以50:50的配比,温度25
℃,流速1.00ml/min,配制某一浓度的样品用于测不同波长的信号。
表3水甲醇流动相的信号VS波长
波长 | 峰面积 | 峰高 |
254 | 21.83548 | 1.30979 |
254 | 19.87028 | 2.71641 |
254 | 21.24252 | 2.83819 |
254 | 19.92372 | 2.75292 |
254 | 19.20719 | 2.666 |
254 | 19.58259 | 2.68754 |
254 | 19.25777 | 2.64515 |
254 | 20.66354 | 2.82911 |
254 | 19.46472 | 2.71629 |
254 | 19.76038 | 2.75006 |
254 | 18.87213 | 4.50579 |
254 | 19.25948 | 4.53633 |
254 | 19.36697 | 4.5557 |
254 | 19.39382 | 4.5274 |
254 | 19.59477 | 3.69836 |
254 | 19.53112 | 3.68798 |
254 | 19.73312 | 3.71707 |
260 | 35.58664 | 6.75896 |
260 | 35.72891 | 6.7895 |
260 | 35.90482 | 6.80877 |
260 | 36.26693 | 6.87341 |
270 | 66.74742 | 12.69525 |
270 | 67.12888 | 12.77217 |
270 | 68.28195 | 13.0002 |
280 | 44.35106 | 8.42251 |
280 | 44.28596 | 8.4277 |
280 | 43.60561 | 8.30447 |
275 | 64.01466 | 12.19947 |
275 | 63.9854 | 11.85461 |
272 | 68.86501 | 13.12566 |
272 | 69.72466 | 13.31705 |
272 | 70.36848 | 13.44378 |
272 | 68.93624 | 13.13122 |
273 | 67.50188 | 12.89644 |
273 | 67.51179 | 12.83864 |
268 | 64.25979 | 12.23333 |
268 | 64.2391 | 12.20143 |
280 | 44.76415 | 8.49216 |
280 | 44.59446 | 8.45897 |
275 | 63.07079 | 11.97249 |
275 | 64.10613 | 12.18176 |
图3水甲醇流动相的信号VS波长
表4水乙腈流动相的信号VS窄波长
波长 | 峰面积 | 峰高 |
272 | 3.84002 | 1.02326 |
272 | 3.87423 |
272 | 3.4 | 1.5 |
272 | 3.279 | 0.922 |
272 | 3.2878 | 0.92 |
280 | 2.455 | 0.7 |
280 | 2.333 | 0.6588 |
275 | 3.029 | 0.832 |
275 | 2.84 | 0.8 |
275 | 2.88 | 0.803 |
270 | 2.77 | 0.77 |
270 | 2.74 | 0.76 |
265 | 2.224 | 0.601 |
265 | 2.1067 | 0.59 |
265 | 2.06 | 0.55 |
图4水乙腈流动相的信号VS波长
可以看出两种流动相均在272nm处信号最强。后来发现紫外波长范围太窄,265nm以下也属于紫外区,情况怎样不清楚,又放宽范围。因溶液浓度不同所以未与表4数据合并,单独列于表5并作相应图示。
表5水乙腈流动相的信号VS宽波长
波长 | 峰面积 | 峰高 |
220 | 234.2 | 64.20 |
220 | 234.8 | 64.30 |
220 | 238.8 | 64.61 |
220 | 234.7 | 64.40 |
220 | 233.9 | 64.21 |
220 | 234.5 | 64.34 |
221 | 227.0 | 61.41 |
221 | 223.3 | 61.32 |
221 | 222.8 | 61.22 |
222 | 211.1 | 58.03 |
222 | 210.7 | 59.95 |
223 | 191.6 | 52.63 |
223 | 191.5 | 52.63 |
224 | 169.8 | 46.61 |
224 | 169.8 | 46.64 |
225 | 155.8 | 41.68 |
226 | 126.9 | 34.81 |
228 | 78.9 | 21.66 |
230 | 49.4 | 13.51 |
235 | 10.6 | 2.92 |
240 | 4.0 | 1.10 |
245 | 5.9 | 1.60 |
250 | 11.5 | 3.14 |
252 | 14.9 | 4.05 |
254 | 19.1 | 5.24 |
256 | 23.4 | 6.41 |
260 | 35.3 | 9.64 |
265 | 53.6 | 14.70 |
270 | 68.2 | 18.73 |
272 | 70.8 | 19.45 |
274 | 68.6 | 18.89 |
280 | 49.4 | 13.56 |
220 | 237.6 | 64.33 |
218 | 249.3 | 67.52 |
215 | 253.6 | 69.67 |
212 | 257.2 | 69.44 |
210 | 245.8 | 67.59 |
210 | 245.4 | 67.57 |
211 | 249.4 | 68.71 |
213 | 253.3 | 69.72 |
图5水乙腈流动相的信号VS宽波长
从图5可见在220nm附近信号远强于272nm。因此可以根据样品浓度采用不同的波长。
3.各自测得曲线
总结回顾才发现其实两种流动相所做的曲线点并不合适。因为现在重心转移,没法重新去做。先记在此。
表6水甲醇标准曲线
浓度mg/L | 峰面积 | 峰高 |
4.09 | 39.29919 | 7.32188 |
4.09 | 38.58243 | 7.03954 |
4.09 | 39.56756 | 7.02998 |
0.2 | 1.74548 | 0.150435 |
0.2 | 1.84043 | 0.1615 |
0.04 | 0.306 | 0.066 |
0.04 | 0.3026 | 0.067 |
0.2 | 1.859 | 0.218 |
0.2 | 1.7379 | 0.19204 |
0.08 | 0.71052 | 0.0988 |
0.08 | 0.7756 | 0.0921 |
图6水甲醇标准曲线
表7水乙腈标准曲线
浓度mg/L | 峰面积 | 峰高 |
0.0409 | 0.820302 | 2.22797 |
0.0409 | 0.745984 | 0.200298 |
0.0409 | 0.769751 | 0.209018 |
0.409 | 7.08068 | 1.95499 |
0.409 | 7.09626 | 1.97114 |
0.409 | 7.19623 | 1.97319 |
4.09 | 69.93359 | 19.31038 |
4.09 | 71.09011 | 19.65752 |
4.09 | 71.65461 | 19.78418 |
图7水乙腈标准曲线
4.一些应该记住的有用信息
4.1流动相A位瓶一般是水,其它可放有机相。
4.2开机调泵阀时,如果气泡长时间排不尽,可能管道堵塞,考虑换通道。
4.3滤芯不可用超声波清洗,否则超坏。
4.4不能用纯水做流动相。水样是可以进样的。
4.5基线漂移超过1mAu则可能D灯有问题。
4.6进样时要插到底,不拔针,扳到inject后才可取出针。六通阀其中两个废液出口,要与进样口在同一水平高度,避免因虹吸现象出现倒流或者流不出来带走样品。