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液相色谱（LC）

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主题：【已应助】流动相

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发表于：2022/06/19 14:03:47 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

今天同事问了一个问题，他问：公司的开放实验室，不管做什么类型的样品，流动相都用酸性流动相？添加三氟乙酸。
谁知道是为什么吗？

推荐答案：安平回复于2022/06/20

流动相是否需要加入添加剂，需要何种添加物，最终取决于待测物质。

可能该实验室测定的样品，均需要此添加物才能实现良好的分析效果。

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wuyuzegang

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2022/6/20 9:38:16 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

这个要看具体物质，不能什么体系都加三氟乙酸。

可以参考一下具体机理

在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸（TFA）作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。三氟乙酸与多肽上的正电荷及极性基团相结合以减少极性保留，并把多肽带回到疏水的反相表面。以同样的方式，三氟乙酸屏蔽了固定相上残留的极性表面。三氟乙酸的行为可以理解为它滞留在反相固定相的表面，同时与多肽及柱床作用。
三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200nm ，对多肽在低波长处的检测干扰很小。
改变三氟乙酸的浓度，可以细微地调整多肽在反相色谱上的选择性。这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析（如多肽的指纹图谱）的信息量是非常有益的。
三氟乙酸添加在流动相中的浓度一般为 0.1% ，在这个浓度下，大部分的反相色谱柱都可以产生良好的峰形，当三氟乙酸浓度大大低于这个水平时，峰的展宽和拖尾就变得十分明显。

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2022/6/20 9:39:55 Last edit by dahua1981

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2022/6/20 10:11:49 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 wuyuzegang(dahua1981) 发表:这个要看具体物质，不能什么体系都加三氟乙酸。可以参考一下具体机理在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸（TFA）作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。三氟乙酸与多肽上的正电荷及极性基团相结合以减少极性保留，并把多肽带回到疏水的反相表面。以同样的方式，三氟乙酸屏蔽了固定相上残留的极性表面。三氟乙酸的行为可以理解为它滞留在反相固定相的表面，同时与多肽及柱床作用。三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200nm ，对多肽在低波长处的检测干扰很小。改变三氟乙酸的浓度，可以细微地调整多肽在反相色谱上的选择性。这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析（如多肽的指纹图谱）的信息量是非常有益的。三氟乙酸添加在流动相中的浓度一般为 0.1% ，在这个浓度下，大部分的反相色谱柱都可以产生良好的峰形，当三氟乙酸浓度大大低于这个水平时，峰的展宽和拖尾就变得十分明显。

未知物质

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安平

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2022/6/20 10:49:23 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

流动相是否需要加入添加剂，需要何种添加物，最终取决于待测物质。

可能该实验室测定的样品，均需要此添加物才能实现良好的分析效果。

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2022/6/20 10:56:18 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。

b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。

c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。

d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。

e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。

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