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主题：【已应助】求助pmp衍生化测多糖的问题

浏览0 回复13 电梯直达
Ins_232a159b
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发表于：2022/05/17 19:18:09 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我现在做标准单糖的PMP衍生化，用HPLC检测，用的是C18柱，对照品是葡萄糖、甘露糖、半乳糖，木糖和半乳糖醛酸，出现的问题是：各单糖对照品在同一个时间出峰，混和各单糖标品后也只出现一个峰（进了一针混标），尝试了调流动相比例，没有一点作用，几天后用空白溶剂进了一针，发现全是溶剂pmp的峰（就是下图的峰，不管样品、单标还是混标全都是这样的一个峰）！！！整个人直接裂开，实验进行不下去，求各位做过的大佬帮帮！！！！！


衍生方法：吸取混合标准品溶液400μl，加0.5mol/L的PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）甲醇溶液与0.3mol/L的氢氧化钠溶液各400μl，混匀，70℃水浴反应100分钟。再加0.3mol/L的盐酸溶液500μl，混匀，用三氯甲烷洗涤3次，每次2ml，弃去三氯甲烷液，水层离心后，取上清液注入液相色谱仪，测定。
推荐答案：安平回复于2022/05/18
看上去是衍生并没有成功所致。 即衍生和不衍生，结果相同。


建议考虑一下衍生条件，衍生试剂是否不良。
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wuyuzegang
dahua1981
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2022/5/18 18:55:04 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
既然无法分开，如果排除标准品的原因后说明色谱条件有待优化，可以参考下面文献中的方法试试
附件：
柱前衍生化HPLC法测定疏...注射液及其原药材中糖的含量_金滢.pdf
PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成_黄小兰.pdf
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安平
byron1111
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2022/5/18 22:02:34 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看上去是衍生并没有成功所致。 即衍生和不衍生，结果相同。


建议考虑一下衍生条件，衍生试剂是否不良。
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Ins_232a159b
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2022/5/19 10:43:27 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 安平(byron1111) 发表:
看上去是衍生并没有成功所致。 即衍生和不衍生，结果相同。

建议考虑一下衍生条件，衍生试剂是否不良。
谢谢，我昨天重做了一下衍生化，混标终于出峰了，但是现在有一个问题，对照品的峰太低了（主要是pmp的峰太高太高了），我昨天用氯仿萃取了5次，有50min了，但是pmp的峰还是这样老高老高，我想问一下还有什么办法吗
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Ins_232a159b
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2022/5/19 10:44:51 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wuyuzegang(dahua1981) 发表:
既然无法分开，如果排除标准品的原因后说明色谱条件有待优化，可以参考下面文献中的方法试试
谢谢
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Ins_4c69e706
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2022/8/23 11:45:39 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
您好，我也再做pmp衍生化。我也遇到了一些问题，想跟您交流一下，传授一下经验。万分感谢！

我现在一直衍生化不成功，快要崩溃了。衍生化后的单糖溶液有粉红色，还有无色的。请问出现这个现象是正常的吗？
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端木
icetrob
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2022/10/10 19:03:16 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Ins_4c69e706(Ins_4c69e706) 发表:
您好，我也再做pmp衍生化。我也遇到了一些问题，想跟您交流一下，传授一下经验。万分感谢！

我现在一直衍生化不成功，快要崩溃了。衍生化后的单糖溶液有粉红色，还有无色的。请问出现这个现象是正常的吗？
现在有没有衍生化成功？
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valorb
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2022/10/10 23:21:20 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
糖的衍生应该有很多文献，查查
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dadgoh
dadgoh
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2022/10/11 8:30:34 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 端木(icetrob) 发表:现在有没有衍生化成功？
衍生试剂要求新鲜，既现配现用。
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端木
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2022/10/12 12:44:26 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dadgoh(dadgoh) 发表:
衍生试剂要求新鲜，既现配现用。
现配现用还是没有衍生成功，不知道为什么
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Ins_ff77a242
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2022/10/29 9:21:58 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我想问一下 用葡萄糖衍生后 不同浓度的葡萄糖 为啥跑出峰的位置不一样 您一般衍生多久 衍生过程有什么要注意的吗
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