主题：【转帖】柱色谱和薄层色谱

实验15  柱色谱和薄层色谱

Column Chromatography and Thin Layer Chromatography

实验课时：5学时

实验类型：基本操作

一、目的与要求

1．  学习柱色谱、薄层色谱技术的原理和应用。

2．掌握溶剂极性的规律和洗脱液的配制。

3．掌握柱色谱、薄层色谱分离技术和操作要点。

4．学习旋转蒸发仪的使用

二、内容提要

柱色谱分离荧光黄和亚甲基蓝-乙醇溶液；旋转蒸发仪回收溶剂；薄层色谱分离和鉴定A、P、C成分。一人一组。

三、教学程序

1、  讲解：

1．1  色谱法的基本原理：利用混合物中的各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其他亲和作用性能的差异，使含混合物的气体或溶液流经该物质时，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。

1．2  柱色谱

（1）柱色谱（这里指吸附色谱）的原理类似于薄层色谱，欲分离的混.合物中的各组分分配在吸附剂和洗脱剂之间，化合物被吸附剂吸附愈强，该化合物溶解在洗脱剂中则愈少，沿洗脱剂移动的距离则愈小。

（2）特点：色谱柱填充的吸附剂的量远远大于薄层板，且色谱柱大小可以依欲分离的物质的量的多少而选择，需样品的量多，可用于分离比较大量（克数量级）的物质。

（3）用途：化合物的分离与纯化；较大量（克数量级）的样品的制备。

1．3  薄层色谱

（1）薄层层析在形式上和操作上与纸层析类似，但其分离物质的原理有本质的区别。纸层析为分配层析，而薄层层析为吸附层析，其基本原理与吸附柱层析一致。

（2）需样量少，几微克即可；简单、快速。

（3）用途：化合物的分离；化合物的鉴定，同一化合物在相同条件下的Rf值相同；跟踪化学反应，判断反应进行的方向和程度；作定量分析。

2、示范：本实验演示色谱柱的装填；薄层色谱的点样方法。

3、教学安排与特定要求（如报告格式、装置图）

两人一根色谱柱，轮流做；一人一块板。

四、实验关键之处及注意事项（包括故障的排除和疑难问题的解答）

4．1  柱色谱

1、吸附剂必须均匀地填在柱内，没有气泡、没有裂缝，否则将影响洗脱和分离。

2、加入沙子的目的是使加料时不致把吸附剂冲起，影响分高效果。若无沙子，也可用滤纸覆盖在吸附剂表面。

3、为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的。否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的效果。

4、最好用移液管将欲分离溶液转移至柱中。

4．2  薄层色谱

1、制板时，硅胶用水调成刚好能流动的糊状物为佳，勿太浓或太稀，并即刻铺在层析板上。做好的层析板应均匀一致，否则会影响分离效果。

2、点样量不能太大，否则会导致拖尾至使重点分离不完全。建议在同一层析板上依讲义图9~1点两个样点（同一样品），其中样点1点样最少一些（φ≤1mm），样点2点样量稍大一些，这样，实验的效果化较好。

3、展开剂不要加得太多（1~2ml即可），展开时不要把样点浸入展开剂中。

4、待溶剂前沿离层析板顶端仅1~2mm时方能取出，否则色点分离不完全。但溶剂不能冲顶，否则色点会扩散而影响分离效果。

5、展开结束后，应立即记下溶剂前沿的位置，并把色谱图照原样及时记录在报告本上，注明各点的颜色，并计算各点的Rf值。

6、本实验的色谱图上可出现3~6个色点，在此范围内色点越多，分离效果越好。

7、薄层层析不仅可用来分离有色物质，也可分离无色物质。

8、操作要小心，特别是点样时，不要损坏层析板。

9、实验完毕倒掉展开剂，层析缸不用洗。