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原文由 elevern 发表:
事先声明：我是来挨拍的。
全反式维甲酸中有很长的共轭结构，照理来说紫外吸收应该比较好，采用常规的HPLC血浆极限应该可以至少测到10-50ng/ml，如果不是做人血样的，可能用液质有些浪费。你的质谱图1ug的图(我不知道是血浆样品还是纯标)，离子流很大，峰面积才5000多(没看错吧我)，照这样算下去，LOQ也就2ng。如果你峰上面不喜欢标峰面积，标的是信噪比，我道歉，当我没说。
（waters的MS就是稳定，就算峰面积只有10，也能拿来定量！）
另外，从结构上说，维甲酸应该是用酸沉淀比较好，高氯酸或三氯醋酸，回收率很高。为了避免基质效应，用提取法的话，即使采用酸化再提取，估计回收率也不会太高。不过我没有看到楼主做的方法学，不太好下结论。
另外，关于基质效应的话，我觉得和楼主用的柱子和液相方法有一定的关系。你样品在2min前后出完，这个时候蛋白肯定是没有出完的，常规柱都要差不多3min左右蛋白才能跑净。如果把液相色谱柱和液相条件调整一下的，我觉得会更好一些，采用酸沉淀也能避免基质效应，可能样品的稳定性也会好一些。
内标物的选择，在血样的处理时候必须要考虑两个方面。一个是质谱的响应，也就是楼上各位讲的。我曾经碰到过，进样一个月，样品响应越来越小，内标响应越来越大，全部返工，痛啊。
另外一个，是在血浆样品处理当中，用于抵消处理方法、步骤造成的损失，为什么喜欢用同系物，就是物理性质比较类似、pKa接近，提取回收率比较接近、稳定性接近等等方面。
。我一一回答，看看能否回应你的提问。原文由 dickwang2008 发表:
四、实例
确定质谱条件后，我们对色谱条件进行了优化。在这里最主要的是根据化合物的极性大小选择合适的色谱柱，由于该化合物含有羧基，极性相对较大，我们就选用C8填料的色谱柱为分离媒介。同时为了有助于化合物的离子化，加入一定浓度的乙酸，对峰型的改变也有一定程度的作用。
原文由 sally98 发表:原文由 dickwang2008 发表:
四、实例
确定质谱条件后，我们对色谱条件进行了优化。在这里最主要的是根据化合物的极性大小选择合适的色谱柱，由于该化合物含有羧基，极性相对较大，我们就选用C8填料的色谱柱为分离媒介。同时为了有助于化合物的离子化，加入一定浓度的乙酸，对峰型的改变也有一定程度的作用。
请教楼主一个问题，既然该化合物呈酸性，流动相中加入乙酸不是会抑制该物质的离子化么？从理论上来讲，应该加入乙酸铵之类的缓冲盐，将pH值调得稍高一点吧？谢谢！
原文由 dickwang2008 发表:原文由 sally98 发表:原文由 dickwang2008 发表:
四、实例
确定质谱条件后，我们对色谱条件进行了优化。在这里最主要的是根据化合物的极性大小选择合适的色谱柱，由于该化合物含有羧基，极性相对较大，我们就选用C8填料的色谱柱为分离媒介。同时为了有助于化合物的离子化，加入一定浓度的乙酸，对峰型的改变也有一定程度的作用。
请教楼主一个问题，既然该化合物呈酸性，流动相中加入乙酸不是会抑制该物质的离子化么？从理论上来讲，应该加入乙酸铵之类的缓冲盐，将pH值调得稍高一点吧？谢谢！
是这样子的，液相色谱分离和质谱检测是一个矛盾体。色谱分离要求化合物呈游离状态，对于酸而言就要求在酸性条件下才能呈游离状态；而对于质谱检测而言，需要检测离子，即需要化合物能够很好的离子化，这对于酸而言就需要在碱性条件下较好。对于这样矛盾的体系，我们就只能兼顾考虑，那么最好选择在化合物的pKa值附近，上下不超过1。
不知道我说的有道理没？有问题继续发帖。
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