主题：【转帖】生物标本制作方法和技术！

6、卡尔氏（Carl's）液
配方
95%酒精 170毫升 蒸馏水 280毫升
福尔马林 60毫升 冰醋酸 20毫升
冰醋酸要在临用前加入。
这时极好的昆虫保存液，常用来杀死和保存小型、身体柔软的种类入螨、蜈蚣、马陆等。在这溶液里加入少量甘油，能防止虫体变脆。
7、卡诺氏（Carnoy's）液
配方
纯酒精 6份 冰醋酸 1份
氯仿 3份
这种固定液能固定细胞质和细胞核，尤其适宜于固定染色体，所以多用于细胞学的质片，还用来固定腺体、淋巴组织以及原生动物的胞壳等。这种固定液穿透得快，因此一般小块组织固定20～40分钟，大型材料不超过3～4小时。固定后用95%或纯酒精洗涤，换液两次，移到石蜡中或用80%酒精保存。
8、吉尔桑氏（Gilson）液
配方
60%酒精 50毫升 冰醋酸 2毫升
80%硝酸 7.5毫升 升汞 10克
蒸馏水 440毫升
这是常用的固定液，适用于肉质菌类，特别是柔软胶质状的材料如木耳等，也广泛用于无脊椎动物和一般组织和蛙胚的固定。固定时间18～20小时，然后用50%酒精冲洗材料，除去升汞。如果用水冲洗，会使材料膨胀。混合液保存24小时后失效。
9、福尔马林--醋酸--酒精溶液（FAA）液
配方
50%酒精 85毫升 福尔马林 10毫升
冰醋酸 5毫升
这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织，昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定12小时，木质化组织要固定1周，材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在50%酒精中冲洗1～2次。
10、克来宁堡氏（Kleinenberg's）液
配方
在20%硫酸水溶液内加入苦味酸，直到饱和。
这种固定液适用于鸡胚的固定，也用于许多小型海洋生物的固定。
11、包因氏（Bouin's）液
配方
苦味酸饱和水溶液 75毫升 冰醋酸 5毫升
福尔马林 25毫升
这是常用的良好固定剂，渗透迅速，固定均匀，组织收缩少，染色后能显示一般的微细结构。一般动物组织、无脊椎动物的卵和幼虫以及一般组织学、胚胎学的材料，如植物组织的根尖和胚囊都可用它来固定。一般组织固定24～48小时，小块组织固定4～16小时，动物材料能在这种固定液中长期保存。固定后，动物材料用70%酒精冲洗净苦味酸，到无黄色为止（用酒精冲洗时，加几滴氨水，可加快除去黄色）；植物材料用20%酒精冲洗几次。
12、绍丁氏（Schaudinn's）液
配方
甲液 升汞饱和水溶液 66毫升
95%酒精 33毫升
乙液 冰醋酸 1毫升
甲、乙液要在临用前混合。
这种固定液适用于固定有鞭毛的原生动物、植物的精子和游动孢子等。材料如制作涂布装片，可在40摄氏度下固定10～20分钟。
13、眼球固定液
配方
丙酮 40毫升 冰醋酸 1.5毫升
升汞 2克 甲醛 10毫升
蒸馏水 40毫升
这种固定液适用于眼球的固定，并可在固定液中长期保存。
14、纳瓦兴氏（Nawaschin's）液
配方
甲液 铬酸 1.5克 冰醋酸 10毫升
蒸馏水 90毫升
乙液 福尔马林 40毫升 蒸馏水 60毫升
临用前将等量甲、乙液混合。
高等植物有丝分裂材料适宜在这种固定液里固定或长期保存。

15、绿色标本保存液
配方一
硫酸铜 5克 水 95毫升
这种保存液适用于绿色植物和一切植物绿色部分的保存。植物放入硫酸铜液后，由绿变黄，再由黄变绿。这时取出材料，用清水漂洗干净，浸在5%福尔马林液内长期保存。
配方二
硫酸铜 0.2克 95%酒精 50毫升
福尔马林 10毫升 冰醋酸 5毫升
水 35毫升
先把硫酸铜溶于水中，然后加入配方中的其他组分。绿色标本能长期的贮存在该液中。
配方三
醋酸铜 15～30克 50%醋酸 100毫升
在50%醋酸中逐渐加入醋酸铜，直到饱和。适用时取原液1份，加水4份，即成稀释的硫酸铜溶液。
这种保存液适用于表面有蜡质、蛙质、质地较硬的绿色植物保色。加热稀释到醋酸铜溶液，放入植物，轻轻翻动，到植物由绿转黄再转绿色时取出植物，用清水漂洗后，浸入5%福尔马林液内保存。
（续上）16、红色标本保存液
配方一
甲液 硼酸 3克 福尔马林 4毫升
水 400毫升
乙液 亚硫酸 2毫升 硼酸 10克
水 488毫升
把红色的果实浸在甲液里1～3天，等果实由红色转深棕色时取出，移到乙液里保存，同时在果实内注入少量乙液。
配方二
氯化锌 2份 福尔马林 1份
甘油 1份 水 40份
先把氯化锌溶解在水里，然后加入配方中其他组分。溶液如果浑浊而有沉淀，应过滤后使用。红色果实能在此液中保存。
17、黄色标本保存液
配方一
甲液 硫酸铜 5克 水 95毫升
乙液 6%亚硫酸 30毫升 甘油 30毫升
95%酒精 30毫升 水 900毫升
先把植物标本在甲液中浸1～2天，取出洗净后，浸入乙液中保存，同时在果实内注入少量乙液。
配方二
6%亚硫酸 568毫升 80%酒精 568毫升
水 450毫升
植物材料能在这种保存液中长期保存。
18、紫色标本保存液
配方一
95%酒精 20毫升 福尔马林 20毫升
水 60毫升
使用时，取1份原液加9份水稀释，植物材料能在这溶液中保存。
配方二
食盐饱和水溶液 30毫升 水 175毫升
福尔马林 20毫升 甘油 少量
植物材料能在这溶液中保存。
19、白色标本保存液
配方一
甲液 5%硫酸铜溶液
乙液 1～4%亚硫酸溶液
全白色植物材料能浸在乙液中保存。杂有绿色的白色植物材料先浸在5%硫酸铜溶液内1～3天，用清水漂洗后浸在乙液中保存。

配方二
氯化锌 32克 95%酒精 125毫升
水 1000毫升
把氯化锌溶于水中，再加入酒精。植物材料能在这溶液中保存。
20、绿色幼虫保存液
甲液 福尔马林 4毫升 醋酸铜 1克
硝酸钾 1克 水 100毫升
乙液 甘油 20毫升 醋酸钾 10克
福尔马林 1毫升 水 100毫升
先把昆虫幼虫放在80摄氏度热水中烫死，晒干后放在甲液中固定1星期左右，最后放入稀释一倍的乙液中保存。
配方二
甲液 95%酒精 90毫升 甘油 2.5毫升
福尔马林 2.5毫升 冰醋酸 2.5毫升
氯化铜 3克
乙液 冰醋酸 5毫升 福尔马林 4毫升
水 100毫升
将绝食1～2天的幼虫，用注射器从肛门向体内注射甲液，12小时后转入乙液内保存，约20天更换1次乙液。
21、黄色幼虫保存液
甲液 苦味酸饱和液 10毫升 冰醋酸 5毫升
福尔马林 2.5毫升
乙液 与绿色幼虫保存液配方二乙液相同
用注射器从幼虫肛门内注入甲液，12小时后转入乙液内保存。
22、红色幼虫保存液
硼砂 2克 50%酒精 100毫升
昆虫幼虫能在这溶液中保存。
23、动物内脏原色保存液
甲液 福尔马林 200毫升 硝酸钾 15克
醋酸钾 30克 水 1000毫升
乙液 甘油 200毫升 醋酸钾 100克
麝香草酚 2.5克 水 1000毫升
先把材料放在甲液内固定，固定时间根据材料的大小而定，一般需1～5天。当材料失去自然色泽而呈暗褐色时，用手轻轻挤压，直到没有淡红色血水流出时，取出材料，用清水冲洗，在浸在85%酒精中3～24小时（不能太久，否则易破坏色素），到血色恢复后，浸在乙液中保存。
（八）脱水剂
在显微镜制片中，生物实验室最常用的脱水剂是酒精。
1、酒精 市场出售的酒精有95%和100%（纯酒精）两种。高浓度的酒精（95%以上）对组织有强烈的收缩和脆化的缺点，因此材料在水洗后不能立即投入高浓度酒精中。脱水时为了避免材料萎缩、僵硬，应在不同浓度的酒精里逐渐脱水。一般组织（除神经组织、柔软组织外）可从70%酒精开始经80%、95%、100%酒精，使它逐步脱水。对一些柔软组织如胚胎组织、低等无脊椎动物组织，要从70%酒精以下的50%或30%或20%开始，否则组织收缩较大。以上各种浓度的就经常用95%酒精加蒸馏水稀释而成，而不用纯酒精稀释，因为它的价格太贵。
2、质取水酒精 在酒精脱水剂中，无水酒精是最高一级的浓度脱水剂，中学生物实验室一般用一下方法由95～96%的酒精来制取无水酒精。取蓝色的结晶硫酸铜粉末，放入烘箱内烘烤，直到蓝色粉末脱水呈青白色时止。在酒精里放入青白色的硫酸铜粉末（它遇水就转蓝色），直到加入的硫酸铜不变蓝色，表明酒精以呈无水状态，就装瓶密封。
3、回收酒精 脱水用的酒精，使用以后，要按各种浓度分别收集起来。待收到一定量后，就可过滤，并用酒精比重计测定浓度，然后，再用来配置各级低度酒精。如果用过的酒精浓度较低，要蒸馏后再用。
（九）透明剂
1、二甲苯 它是目前应用最广的一种透明剂，价格比较便宜，折光率1.497，易挥发，无色透明液体，易溶于酒精又能溶解石蜡，能跟封藏剂树胶混合，不能和水混合，透明作用强，且迅速。它的缺点是容易使组织收缩变硬、变脆，所以组织不能在其中停留过久，同时材料必须完全脱水后才能应用，否则做成的标本易出现空洞，经封藏后会产生白色云雾状，影响观察和保存。

用二甲苯透明时，一般先用纯酒精和二甲苯等量混合浸1～2小时，置换材料中的酒精，再放在纯二甲笨中透明，总透明时间不宜超过3小时，染色后的制片一般在二甲苯中经过5～10分钟透明即可。
2、甲苯 它的性质和二甲苯相同，价格比较便宜，可作二甲苯的代用品。它的优点是组织在二甲苯中留置12～24小时也不变脆，缺点是透明较慢。
3、苯 它的性质近似二甲苯，易爆炸，人吸入苯能引起中毒，所以用时必须小心。
4、氯仿 组织在其中浸存较久，收缩不太厉害，也不会变脆，容易挥发。它的缺点是渗透力稍弱，透明时间比二甲苯、苯还慢，所以应比二甲苯延长约2～3倍时间。他适于透明大块组织。
5、香柏油 用香柏油作透明剂效果很好。它的折光率是1.515，有高度透明作用，使组织收缩和硬化的程度比任何透明剂（二甲苯、苯、氯仿等）都小，价格较便宜。它的缺点是透明慢，小块组织一般需12小时以上，不易被石蜡所替代，不能跟树胶相混合。为浸腊方便起见，经香柏油透明的组织，尚需再用二甲苯或苯洗几次，除去香柏油，以便加速石蜡的浸透。香柏油极毒，用时必须小心。
嘴纯净的香柏油，可作油镜上用的浸油。
（十）封装剂
1、加拿大树胶
加拿大树胶是半透明的固体树脂，能溶于二甲苯、苯等溶剂。加拿大树胶溶于二甲苯后，它的折光率是1.52，接近于玻璃的折光率（1.51），透明度很好，用以封片几乎无色，干后坚硬牢固，可长期保存。因此，他是封片常用的封藏剂。市售的加拿大树脂有浓液体和固体两种。如果是固体，可以在树胶中加入约相当于树胶体积一半量的二甲苯，放在温暖处，时常搅拌，促使树胶溶化。溶化后的较液浓度以胶液能沿玻璃棒一端顺利下流为宜（如果要封藏后使它干燥更快，可用苯代替二甲苯）。
加拿大树胶在使用和贮存时应注意：1、不能加热，否则树胶立即变成深褐色，影响封片后的观察；2、树胶应贮存在棕色瓶内，避光保存；3、玻璃瓶口应密闭，以防蒸发凝固；4、为了防止树胶变酸，在树胶内加入几小块用二甲苯清洗过的大理石，以中和酸性。
2、阿拉伯树胶
用阿拉伯树胶作为封藏剂的优点是便于在这种封藏剂中整理标本形态。阿拉伯树胶作为封藏剂有多种配方，下述配方适于小型昆虫的整体状片。
配方
阿拉伯树胶 8克 水合氯醛 20～40克
甘油 5毫升 冰醋酸 3毫升（可略）
蒸馏水 10毫升
配置方法 先把纯净的阿拉伯树胶放在蒸馏水里，加热，待胶溶化后，加入水合氯醛，边加边搅拌，使它充分溶解后加入甘油和冰醋酸，搅拌均匀后，贮存在瓶里，密闭保存。贮存时要避免灰尘或湿气浸入。
3、乳酸-石炭酸
这种封藏剂用于整体装片，尤其适用于封藏藻类、菌类、苔藓的原叶体或其他较小材料。
配方
石炭酸 1份 乳酸 1份
甘油 1～2份 蒸馏水 1份
（十一）消毒剂
1、酒精
70%的酒精杀菌力最强，它能使蛋白质脱水和变性，在3～5分钟内杀死细菌。因此，它用于消毒和防腐，适用于皮肤和器械、塑料制品等的消毒。高浓度的酒精（95～100%）能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，使酒精分子不易透入，因此杀菌能力反而弱。
2、碘酒
碘酒是碘和碘化钾的酒精溶液，2%的碘酒在10分钟内能杀死细菌和芽
孢，可用于皮肤的消毒。药房出售的一般是2%的稀碘酒。实验室内也可自配碘酒，配方为：
碘化钾 25.克 碘 3.5克
95%酒精 95%酒精 蒸馏水 27毫升
先取碘化钾溶在2毫升蒸馏水中，再加入碘，搅拌后加入酒精，到碘充分溶解后，补足蒸馏水，即成碘酒。
3、高锰酸钾
高锰酸钾是强氧化剂，有很强的杀菌作用。0.1%水溶液用作皮肤消毒，2～5%水溶液能在24小时内杀死细菌芽孢。这溶液在空气中溶液分解，失去氧化能力，要现用现配。

4、苯酚（石炭酸）
石炭酸是有效的常用杀菌剂，1%水溶液能杀死大多数的菌体，通常用3～5%水溶液作接种室喷雾消毒或器皿的消毒，5%以上溶液对皮肤有刺激性。在生物制品中，加入0.5%石炭酸可作防腐剂。
5、来苏尔
来苏尔即煤酚皂溶液。它的杀菌效力比石炭酸大4倍，通常以1～2%溶液用于手的消毒（浸泡2分钟）和无菌室内喷雾消毒，5%溶液多用于各种器械和器皿的消毒。
6、新洁尔灭
新洁尔灭是常用的消毒剂，主要用于皮肤、医疗器械、器皿、接种室空气等的消毒灭菌，对许多非芽孢型病原菌、革兰氏阳性菌和阴性菌经几分钟接触即灭菌，尤其对格兰氏阳性菌杀菌力更大。本品原液的浓度是5%，通常用0.1～0.25%水溶液。用新洁尔灭消毒金属器械时，要在1升溶液中加入5克亚硝酸钠，以防生锈。
7、福尔马林
福尔马林是常用的杀细菌、真菌剂。它的2～5%水溶液能在24小时内杀死细菌芽孢，常用来消毒器皿和器具。如果用作无菌室等房屋消毒，取100毫升福尔马林，放在盆内，用小火微热，促使蒸发，在10小时内可消菌3立方米左右体积房屋的空气。
（十二）麻醉剂
1、乙醚 它是无色澄明液体，味灼热，有强挥发性和易燃性。乙醚能使中枢神经系统发生暂时性机能麻痹，因此乙醚吸入法是最常用的麻醉方法。
使用乙醚麻醉鼠类、蛙类时，可将动物放在玻璃钟罩或烧杯中，把蘸有乙醚的棉花球或纱布投入容器内，动物容器内的乙醚蒸气即被麻醉。
使用乙醚麻醉鸽等鸟类时先把动物用纱布包裹固定，取25毫升小烧杯1个内装蘸有乙醚的棉花球把动物头部放入杯内，使它不断吸入乙醚蒸气，动物很快进入麻醉状态。
用乙醚麻醉家兔时取一个较大的容器，用麻醉大鼠等方法使它麻醉，或取一个大烧杯照麻醉鸟类的方法使用权它麻醉。
2氨基甲酸乙酯（乌拉坦） 它是无色的柱状结晶或白色颗粒粉未，无臭味。它是较温和的麻醉药，安全度大，多数实验动物都可使用，更适合于动物。
氨基甲酸乙酯作为麻醉剂，使用时常配成20%水溶液。家兔：直肠藻注1。5克/千克体重；皮下、静脉、腹腔注射0.75～1克/千克体重。蛙类：2克/千克体重，由背部淋巴囊注射。鸟类：1.25克/千克体重，由肌肉注入。鼠：1.5～2克/千克体重，由腹腔注射。在作静脉注射时必须溶在生理盐水中（哺乳类为8.5～9.0）配成10%的溶液，即每千克重注射10毫升。
3硫酸镁（泻盐）和薄荷脑 这两种药品是水溶性麻醉药，麻醉动物所需时间较长，适合于麻醉身体（或某些器官）易收缩、变形的水生动物。使用时，将硫酸镁配制成饱和水溶液，逐滴加入盛有动物的水中，使它逐渐被麻醉。蒲荷脑可装在纱布袋内或直接撒在水面上，使它慢慢溶解、扩散，而达到目的。
（十三）防腐剂
1无毒防腐剂
配方
硼酸粉 2份； 明矾 1份； 樟脑粉 1份
把上述3种粉末混合匀后撒在剥制好的动物皮内。这种防腐剂比咬适宜于中学学生实验时使用。
2亚砷酸膏
配方
肥皂 50克； 亚砷酸 50克； 樟脑粉 20克； 水 150毫升
把肥皂切成蒲片，加入少量水，加热煮化，再加足水用微火煮成米汤状，然后放入亚砷酸的樟脑粉，用玻璃棒搅和，冷却后，凝成糊状。

（十四）密封剂
1石蜡封瓶剂
配方
石蜡（熔点52度）1份； 松香 1份；甘油 数滴
把上述配方中各组分别加热熔化。擦干瓶口和玻璃瓶盖，把瓶盖浸入热的石蜡液中。在瓶口也涂上热的石蜡液，塞紧后，把标本瓶倒过来，轻轻地放在熔融了的蜡液中，到瓶口突出的外缘全部浸入为止。再迅速地把瓶提出来。瓶口密封后，瓶盖上覆一块纱布，上面再覆一块圆形透明的塑料薄膜，用线扎紧，即完成瓶封。
2、赛璐珞-有机溶剂封瓶剂
取赛璐珞例如废乒乓球剪碎后，浸入在乙醚、工业用丙酮或氯仿（三氯甲烷）等有机溶剂中（一个乒乓球大约用有机溶剂70毫升），加盖后静置2～3天。经常搅拌，待充分溶化成稀浆糊状时，用毛笔蘸取，涂在标本瓶瓶口和瓶塞四周，随着溶剂蒸发，瓶口处就留下一层不透气的薄膜。
3、环氧树脂封瓶剂
配方
618或634环氧树脂 10份 乙二胺 0.5份
苯二甲酸二丁脂 2份
将上述配方三组分调和均匀后，立即涂在封口处，2～3天后就能干固。
（十五）其他配方
1、缓冲液（用于瑞氏染液）
1%磷酸二氢钾 30毫升 1%无水麟酸氢二钠 20毫升
蒸馏水 加到1000毫升
2、重铬酸钾洗液
重铬酸钾 20克 水 100毫升
浓硫酸（粗制） 100毫升
配取时先把重铬酸钾溶于100毫升水中，然后慢慢加入浓硫酸，切不可把水倒入浓硫酸中。
3、抗凝血剂
配方一
草酸钾 2克 氯化钠 6克
蒸馏水 100毫升
在10毫升血液中加入1毫升抗凝血剂
配方二
在10毫升血液中加入0.2克柠檬酸钠
4、红细胞保存液
配方
柠檬酸钠 2.2克 柠檬酸 0.8%
葡萄糖 2.45克 蒸馏水 加至100毫升
取上述保存液75毫升跟500毫升新鲜血液相混。
5、血细胞稀释液
配方一 红细胞稀释液
氯化高汞 0.25克 硫酸钠 2.5克
氯化钠 0.5克 蒸馏水 加至100毫升
这种稀释液用于红细胞计数。在这溶液中加入0.05克曙红B后，常作为血涂片的染色剂。使用时，取1份血液跟100份这种染色剂混合。
配方二 白细胞稀释液
冰醋酸 1.5毫升 1%龙胆紫 1毫升
蒸馏水 加至100毫升
6、甘油蛋白粘剂
打破两只鸡蛋，倒入烧杯内，取出蛋黄，留下蛋白，用筷子调打成雪花状泡沫，然后用粗滤纸或双层纱布过滤。在滤出的透明蛋白液内加入等量的甘油，混合均匀后，加入少量麝香草酚（1：100）作防腐用。