主题：【线上讲座19期】分光光度法测定乳与乳制品中硝酸盐和亚硝酸盐的含量及干扰消除方法（本期活动时间结束）

原文由 闲鹤野云(ruojun) 发表:
玉虎版主，请问：

没有双光束功能的分光光度计是否就不能来分析酸奶中(颗粒和色素干扰)亚硝酸盐了？如果直接在538nm 处检测滤液的吸光度，并从加3种成色剂后的吸光度中减去那个背景吸光度，用单光束的设备就可以了，因为你的背景校正也是用滤液的。

原文由 初学者&九点虎(zhouyuhu) 发表:

原文由 闲鹤野云(ruojun) 发表:
玉虎版主，请问：

没有双光束功能的分光光度计是否就不能来分析酸奶中(颗粒和色素干扰)亚硝酸盐了？如果直接在538nm 处检测滤液的吸光度，并从加3种成色剂后的吸光度中减去那个背景吸光度，用单光束的设备就可以了，因为你的背景校正也是用滤液的。

恩，也有人这么做，称作准双光束分光光度法
这么做有一个问题，就是前后由于光源的原因，光的能量可以回稍有变化，对测定有一点点影响
但这种影响是很小的，所以用单光束扣背景的操作是可行的

原文由 碌碌无为(hhq123) 发表:
今天说一下作者在理论解释方面有待商榷的地方：
1、盐酸-氨水缓冲溶液的作用
作者：加入盐酸-氨水缓冲溶液，控制溶液的酸度，从而消除干扰。因为控制溶液酸度在一定范围，可以使亚硝酸盐与显色剂反应，干扰离子不能生成有色化合物。
本人：
1）盐酸-氨水缓冲溶液在这里起的作用，仅仅是使提取液为弱碱性，无他！
因为在酸性条件下，亚硝酸盐有一定的氧化性能，在相对（后续的比色操作）较长时间的提取过程中，有可能因氧化还原反应而使结果偏低；同时如样品中存在一定浓度的硝酸盐，则其氧化性更强，有可能还原为亚硝酸盐或更低价态的氮化合物，前者会使亚硝酸盐结果偏高，而硝酸盐自身则会偏低！
2）亚硝酸盐与显色剂2磺胺反应属于重氮化反应，理论上应是强酸性的，而不是盐酸-氨水缓冲溶液所提供的弱碱性。
3）提取液中的干扰物质在不同的样品中可能是不同的，同时种类也可能千差万别，在不能确认干扰离子（物质）具体是哪种物质的情况下，你乍知在实验条件下不能与显色剂生成有色化合物呢？
2、参比的选择
作者：选择适当的参比溶液，消除滤液中有色物质的干扰。 本试验以被测溶液作参比溶液，不仅能消除吸收池壁对光的反射和散射带来的干扰，还能消除滤液中共存离子对光的选择性吸收和滤液中有色物质所带来的干扰，所以采用不加显色剂的被测溶液作参比溶液。
本人：标准中以零管来作参比，确实对那些滤液有颜色的样品来说，检测结果有可能会偏高，尤其是对那些含有不能离子化的红色物质的样品来说，结果一定会偏高。所以作者提出要用滤液来扣空白，应当说作者这一想法很好，据了解，大多数的专业检测机构就是如此来扣空白的，但我要说，这样操作的结果还有可能是不准确的!
    从理论上来说，任何可离子化的有色物质，皆是酸碱指示剂（事实上大部分的有色物质是有机弱酸），在不同的pH下，分子结构会发生微小的变化，当酸度变化足够大时，有色物质的酸性与碱性结构的比例发生质的变化，体现在色泽就发生变化，即最大吸收波长会改变！在本实验中，滤液一般是弱碱性的（如样品不是强酸性的话），而加入的显色液1（盐酸：水= 450：550（V：V））却是强酸性的，即反应液是酸性的，此时如用弱碱性的滤液来扣空白，就存在问题了，举个明显的例子，如滤液中存在性质储如酚酞的物质，则滤液是红色的，可反应液却是无色的，结果就会偏低（扣多了），而如滤液中含有性质如杨梅色素（杨梅本身的，估称之），则滤液是淡黄色至无色，可反应液却是红色的（本人试验过），结果就会偏高（扣少了）！
    由于非离子化化合物，在非强酸与强碱的环境中，分子结构一般不会发生变化，如苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ等，在本实验条件下，是可以直接用参比溶液扣空白的。
    综合上述理论，较理想的参比溶液：应是吸取与加入到反应液中的等量的显色液1到滤液中，即分别吸取20.0mL滤液与3.0mL显色液1于50mL容量瓶中，定容后再用之扣空白！！！
3、偏离朗伯-比尔定律的几种情况的认识
作者：样品浑浊，其中被测物质的分布不均匀，入射单色光就会因色散，反射而使透射光的强度减弱，检测器所得到的吸光度就会比实际的正确值偏大，导致偏离朗伯-比尔定律。
本人：教科书中，例了三种偏离朗伯-比尔定律的情况：
1）非单色光，这作者在选波长时，叙述到了
2）非稀溶液：粒子的相互作用的增强影响了吸光能力。
3）显色条件的不科学：致使吸光物质不隐定或发生各种变化。
    从这三种偏离情况中，我们可以看到，即便是处于偏离中，物质还是有吸光的！认识到这很重要。样液浑浊，是会影响到吸光粒子间的分布，使粒子间的距离发生改变，从而发生了如2）那样的偏离，但这不是主要的，主要的应是样液的浑浊，提示着样液中有不溶于样液的颗粒，其对透射光的无选择阻挡（反射与吸收，大多情况反射应是主要的）从而使透光率发生无规则的降低，这就不属于偏离了，应是背景干扰。

原文由 闲鹤野云(ruojun) 发表:
这个讲座很有意思,大家都思考很多,食品安全很重要.
除了牛奶\腌制品(酸菜\酱菜\臭豆腐)以外,卤肉\皮蛋也会有污染的可能.其实很多牙菜如绿豆芽\豆芽等放的时间太久(隔夜),其中的亚硝酸盐会提高的.

原文由 okgogo(OKGOGO) 发表:
通过以上试验可以说明，背景对酸牛乳中亚硝酸的测定干扰很大

原文由 tutm(tutm) 发表:
zhouyuhu先生：您好！
讲座还有一天，赶个末班车。我想问一下：食品安全越来越受到大家的重视，硝酸盐和亚硝酸盐人体中也有，国际上或国内是否有人体中含量方面的数据，比如，血液中、肠道中。这可能对控制摄入量是很重要的。
以上网友提到一些含量较高的食品，如腌制肉类，咸菜，好像还有皮蛋，是不是腌制过的食品一般亚硝酸盐含量都比较高，能高至多少？
这两个问题也许不是您的专业，但您做这方面检测，可能了解多一些，麻烦您了，谢谢！

原文由 碌碌无为(hhq123) 发表:

原文由 初学者&九点虎(zhouyuhu) 发表:

原文由 碌碌无为(hhq123) 发表:
在今晚发表我的看法前,先向班主确认一下:
你说你所使用的UV-2550型紫外可见分光光度计（岛津有限公司）是双光束分光光度计,但据网上查询,似乎是双波长分光光度计,二者的工作原理是不同的,后者要先进些.

双波长是先进，但是我只用到了双光束的功能，所以我说双光束，没错吧

那你这分光光度计应是双光束的双波长分光光度计了,以后可以试试双波长的功能,可以不用参比溶液,就能扣背景的.

原文由 水中月(lianlxh) 发表:

原文由 〓疯子哥〓(madprodigy) 发表:
内容已经添加上，希望大家积极参与哦，再次感谢zhouyuhu版主提供的讲座内容

另外得知zhouyuhu版主感冒，祝早日康复！

不会是甲流吧？
注意休息！多喝水，吃点治疗感冒的中药。你家有现成的护士，这个应该没有问题。

原文由 初学者&九点虎(zhouyuhu) 发表:
第一个问题，之前看文献上说亚硝酸可以致癌，后来又版友说不是，我正在查相关资料，人体方面的数据就更少了，我查了一下每日摄入量，也没有查到，我再看看吧，这方面估计国外研究的比较多，国内只注重经济效益，没人关注这些没有经济效益的实验。
第二
腌制过的的食品中是很高，比如咸菜，还有肉制品中的，好像这个是添加进去的，具体数据我手头还没有，不过我可以问问我一个朋友，他是做肉于肉制品的，实在不好意思