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液相色谱（LC）

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主题：【第二届网络原创作品】从维生素E检测到HPLC分析的新思路

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楚无伤

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发表于：2010/01/19 10:55:09 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被hzhhqt设置为精华；

从维生素E检测到HPLC分析的新思路

此文所有内容乃笔者为参加网络原创作品而作，谬误之处望方家不吝指点。

此文分为四个部分：

一、维生素E检测的两种方法
二、两种方法的优缺点
三、 HPLC分析新思路
四、总结

该帖子作者被版主柏坡加 4积分， 2经验，加分理由：鼓励创新

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2010/1/19 11:00:48 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一、维生素E检测的两种方法
目前，国内国际检测维生素E不外乎两种方法，而前一种方法为通用方法，下面简要的介绍一下这两种方法。

1. 皂化-HPLC法
试样皂化后，经有机相萃取，维生素E用HPLC分离，外标法定量。根据样品的不同，皂化处理以去除干扰，同时在处理的过程中要加入保护剂。皂化反应碱的浓度、用量、皂化反应的温度，因样品的不同而略微有变化。具体处理步骤可参见国标，此处就不在赘言。

2. 萃取-HPLC分流法
试样直接萃取，萃取液过滤后准备进样。此法HPLC的配置和传统的配置不一样，具体的配置方式是：配备两台高压泵、两个六通阀、两根柱子（一根为分析柱、另外一根为预柱，其组分与分析柱相同）。HPLC分析开始的时候，泵一、预柱、分析柱、检测器连接在一起（Figure 1，红线）。泵二直接排空（Figure 1，蓝线）

Figure 1 阀切换前

当分析的样品通过预柱后，左边的阀切换，此时泵一、预柱连接，然后排空（Figure 2，蓝线）；泵二、分析柱、检测器连接在一起（Figure 2，红线）。分析完成后，HPLC自动切换到Figure 1的状态。

Figure2 阀切换后

该帖子作者被版主 hzhhqt加 15积分， 2经验，加分理由：参赛作品

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2010/1/19 11:02:30 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

二、两种方法的优缺点
1. 皂化-HPLC法
此法为国标方法，不管是婴幼儿奶粉还是复合预混料都是用的此方法。优点是通用性强，不管是哪种形态的维生素E都会皂化为同一种形态定量，针对的样品广泛，适合用于通用的检测方法（国标、行标等）。
缺点是皂化的“度”不好掌握，造成稳定性不是很好。而且维生素是有生物活性的组分，统一皂化后虽然能定量，但是不能反应形态组分的生物活性，对于实际生物效果的反映欠佳。拿维生素E举例而言，不同的形态组分其生物活性相差非常之大，皂化后定量是化学方面的，而不能反映出生物活性方面的“量”。

2. 萃取-HPLC分流法
此法为专属的方法，优点是不需要皂化，直接萃取，稳定性良好，而且能够直接测定维生素E的不同形态组分，完美的反映了最终的生物活性“量”。加之前处理过程简单，有效的节约了试剂和时间。
当然缺点也非常明显，其一是HPLC的配置复杂；其二是专属性强。专属性在此处有两个方面，一是针对不同的样品其萃取的试剂、过程不一样，相差非常大；二是标准物质定量的时候因为有不同的维生素E的组分，需要不同形态的维生素E标准品，造成了标准品的繁复。

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2010/1/19 11:03:58 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

三、 HPLC分析新思路
此部分讨论一下方法二所体现出来的亮点。方法二前处理简单，几乎没有对样品进行多少纯化方面的处理，而这样“脏”的样品通过在HPLC上面的处理，达到了完美的纯化和分离的效果。
为了实现在HPLC上面纯化和分离，此法的HPLC多了一台泵、一个六通阀，当待检组分（维生素E）通过预柱后，阀一自动切换，此时泵一直接冲洗预柱，样品中“脏”的部分都保留在预柱上面。当待测组分在分析柱上面分离的时候，预柱被很好的冲洗干净。
此法和传统的HPLC法不一样之处在于，传统的HPLC方法都是增多前处理的步骤，尽量纯化样品，使得上机的样品干净，便于保护分析柱和保证分离的效果；此法是背道而行，前处理的步骤非常之简单，纯化样品的步骤放到HPLC上面进行，既节约了样品前处理的步骤和时间，又保证了分离的效果。在样品分离的时候同时进行预柱的清洗，节约了时间。

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2010/1/19 11:05:09 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

四、总结

当我们对于微量组分进行分析的时候，往往因为前处理步骤的繁多而造成了检测的困难，回收率低下、稳定性差，此时我们可以考虑本文所述的方法二——直接简化前处理的步骤，在仪器上面实现样品的纯化！

绝大多数时候，我们的样品因为“脏”而需要复杂的前处理步骤，此文介绍的方法能够有效的解决这一问题。当然，对于方法二也可以“背道而行”一下，同样的配置，文中举例是因为待测组分的保留弱于杂质，而某些样品或组分刚好反过来，待测组分的保留强于杂质，此时可以先冲洗杂质，然后阀切换分析待测组分。

END

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