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主题：【第三届网络原创参赛作品】HPLC保留时间不稳定案例分析

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sisha
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发表于：2010/07/20 15:15:55 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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维权声明：本文为sisha原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

起因：最近利用液相分析时，目标峰飘忽不定，故有以下文字

一 出峰不稳定示例：

  以下都是出峰时间不稳定的示例：【可以忽略不看：总结一句话，出峰时间出现异常）】
  1）：在做油酸的高效液相方法建立，可是选定的色谱条件下保留时间极其不稳定，同样的样品，两针之间差别都较大（前后进4针，用时大约2 h，保留时间由6.539变到5.868 min）。色谱条件：乙腈：水=8：2;流 速：2ml/min;柱温：20度；波长：205 nm;色谱柱：C18
  2）类似问题。有朋友购买的色素标准品报告上的保留时间是： FUCO：17.55,  HEX:19.10,  ALLO:21.76, ZEA:21.93. 我单个标样分别上样多次测得的保留时间数据为：FUCO：18.329-18.556,HEX:18.592-18.777,ALLO:24.665-24.896,ZEA:25.974-26.054.保留时间算是很稳定了。但是当将保留时间相近的FUCO与HEX混合，ALLO与ZEA混合测得的保留时间为：FUCO：17.63，HEX：18.90。ALLO：24.54，ZEA：25.97。FUCO保留时间提前，HEX保留时间延后，ALLO，ZEA与单个上样的保留时间基本一致。 当4种一起混合再上样时的保留时间为：18.58, 19.80, 24.53, 25.96。与单个上样相比，前两种的保留时间又都延后了，后两种基本没变。请大家帮忙分析一下是什么原因？
    ////友人观点：应该是柱子的选择性对这四种成分竞争性抑制的关系。楼主的情况，看看柱压是否稳定，如果是柱压稳定，考虑液相是否有残留溶剂，还有最后再考虑柱子的类型在分离这种化合物时是否不稳定。////
  3）做液相分离，前一天晚上还是正常的，第二天做的时候发现峰延后了10多分钟，无法找到原因！延后一分钟内还可以理解，但10min就不能接受了，机器安捷伦1100液相，手动进样！反相柱
解决方法：我换了流动相（乙腈，我用的是乙腈和水），倒掉，重新装瓶，可还是不行，我索性将原装的大瓶乙腈也换掉，换了没开封的，但还是这个牌子的，就正常了！之前也一直怀疑流动相有问题，但这种情况还是纳闷！
  ////补充 乙腈的挥发性很强,流动相一定要密封好////
  4） 标线测定出峰时间不断前移【我的问题，我的回答为8，欢迎大家批下】

其中1,2 均未讨论得出解决方法和有效手段，3为提问人自己解决问题，板油补充，道破事实

二 产生这一现象可能因素及原因

  1） 柱流速，柱压稳定程度，通道数量，柱平衡时间（流动相是否是梯度的，梯度是否合适，此外，酸碱性对保留时间也有影响），原因主要是流速与柱压影响样品在管路中流动时间，从而影响到出峰。
  2） 温度
  3） 泵中有气泡
  4 ）缓冲盐：（缓冲盐可以保证待测成分在流动相中成分子状态，因为分子状态和离子状态下的色谱保留行为是不一样的，你用的流动相是水，时间长了，待测成分分解，保留时间会缩短，这也是很正常的）
  5 ）乙腈挥发 （流动相缓慢变化）
  6）  流动相比例配错了，试剂放置错误    ////溶剂的标签，////
  7） 有机相管路堵塞
  8 ）若为标准溶液，二级母液中溶剂与标线母液存在差异，产生偏移？？{注：本人二级母液为乙腈，标线为KCl溶液，母液用量从0.5-6ml定容到100ml，流动相为甲醇，测量出峰时间随溶液浓度提高迁移（乙腈含量升高），本人拙见，如有其他说法，欢迎拍砖}////经过思考，进样量是10uL，所以，乙腈的影响可以忽略，设置温度范围，柱子延长平衡时间，问题解决，主要原因可能是温度和柱子平衡问题引起。
  9）流动相污染，色谱柱逐渐吸附
  10）疏水坍塌 (当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留)

三 小结

  出峰时间不稳定，主要有两种因素：1机器问题，包括机器平衡，温度，管路堵塞等，柱子故障等，2 人为因素，包括试剂配制错误，试剂放置错误管路，试剂挥发等。
      因此，在日常试验中，必须养良好习惯，平衡机器到稳定状态再测试样品，避免仪器未就绪引起麻烦；对于试剂配制，放置等仔细操作，必要地方贴明显标志；保持机器处于稳定环境中间。

欢迎提出异议，不断提升
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老多_小多
emoc98311
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2010/7/20 17:46:01 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
怎么看的感觉乱呀，本来是不错的分享，是我的理解不够？还是楼主没整理好，呵呵

要参加原创比赛吗
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sisha
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2010/7/20 18:02:17 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
怎么看的感觉乱呀，本来是不错的分享，是我的理解不够？还是楼主没整理好，呵呵

要参加原创比赛吗


重新理了下，最近在想这个问题，希望不吝赐教

不知道比赛怎么参加
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有水有渝
xky0230699
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2010/7/20 20:48:42 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我看了，就是讲一个问题，保留时间漂移问题，其中有他人回复的（也举了一个自己类似的经历），也有自己的推测和实验。关键是楼主的编号有点小问题，本来只有一个问题的，让人看起来像好几个问题。
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2010/7/20 20:50:49 Last edit by xky0230699
老多_小多
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2010/7/20 21:58:27 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sisha(sisha) 发表:
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
怎么看的感觉乱呀，本来是不错的分享，是我的理解不够？还是楼主没整理好，呵呵

要参加原创比赛吗


重新理了下，最近在想这个问题，希望不吝赐教

不知道比赛怎么参加

你只要修改下主题词，
参考这个
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100702/2644195/
不过你的作品最好再整理下，那样才更有可能得奖品嘛
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sisha
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2010/7/21 9:49:06 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
修改好了，大家继续拍，改可上次错误认识，乙腈在标液中含量不会引起峰出现大的偏差，（10ul的进样量，可以基本忽略它的影响）
该帖子作者被版主 emoc98311加 10积分， 2经验，加分理由：鼓励参与原创比赛，起初加分太少，补上
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ahuadicp
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2010/7/29 12:51:49 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我想是油酸与流动相之间的问题
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小不董
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2010/8/3 18:46:17 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相的影响是最大的，温度和溶剂也有一定的影响，至于你说的单标的时间推迟了，你可以配个混标看保留时间是否有变化，样品间有可能有竞争，也有可能溶剂浓度变小了，样品的峰就提前了。
该帖子作者被版主 xky0230699加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励讨论
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cxbabc
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2010/8/9 12:03:57 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
保留时间延迟10min，确实问题比较严重。
我觉得主要是流动相管路用错或管路中有气泡。
分析：1.仪器的平衡、温度、管路堵塞，你可以在仪器上看出异常的；
      2.柱子的故障不会因为你更换新试剂就变好的。
      3.试剂配制错误，试剂挥发的问题，在你换过一次试剂的时候就可以解决的。

这是我自己的理解，欢迎大家指正！ 谢谢！
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linliu5795
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2010/9/6 10:35:29 13楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学学学学习
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pandora98
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2010/9/6 12:19:07 14楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.保留时间不稳定，首先检查仪器的问题，同一个样品连续进5针，看看保留时间重复性怎么样？？如果偏差超过一分钟，很可能是仪器出故障了。
2.流动相最好是用机器混合，这样不会有流动相比例改变的问题
3.没有柱温箱会对样品保留时间有影响
4.流动相最好能添加0.1％磷酸，这样能使有些样品全部水解成离子，保留时间能更稳定一些
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2010/9/6 12:38:36 Last edit by pandora98
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