5、 冲洗
凝胶色谱的流动相一半多采用水或缓冲溶液,少数采用水与一些极性有机溶剂的混合溶液,除此之外,还有个别比较特殊的流动相系统,这要根据溶液分子的性质来决定。加完样品后,可将色谱床与洗脱液贮瓶及收集器相连,设置好一个适宜的流速,就可以定量地分布收集洗脱液。然后根据溶质分子的性质选择光学、化学或生物学的方法进行定性和定量测定。
6、 再生
因为在凝胶色谱中凝胶与溶质分子之间原则上不会发生任何作用,因此在一次分离后用流动相稍加平衡就可以进行下一次的色谱操作。但在实际应用中常有一定的污染物污染凝胶。对已沉积于凝胶床表面的不溶物可把表层凝胶曲调,在适当增补一些新的溶涨胶,并进行重新平衡处理;如果整个柱有微量污染,可用0.5molNaCl溶液洗脱。在通常情况下,一根凝胶柱可使用半年之久。
凝胶柱若经多次使用后,其色泽改变,流速降低,表面有污渍等就要对凝胶进行再生处理。凝胶的再生是指用恰当的方法除去凝胶中的污染物,使其恢复其原来的性质。交联葡萄糖凝胶厂用温热的0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液浸泡,用水冲洗到中性;而对于聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶由于遇酸碱不稳定,则常用盐溶液浸泡,然后用水冲到中性。
7、 保存
经常使用的凝胶以湿态保存为主,为了避免凝胶床染菌,可加少许氯仿、苯酚或硝基苯等化学物质,它可以使色谱柱放置几个月至一年。凝胶的干燥应先对凝胶进行浮选,除去细小的颗粒,并用大量水洗,除去盐和污染物,然后逐步增加一春浓度使凝胶收缩,在60~80度干燥,在整个操作过程中的蒸馏水、器皿和房间必须干净。琼脂糖凝胶的干燥操作比较麻烦,并且干燥后还不容易溶张,所以一般仍以湿态保存为主。
PW系列凝胶色谱柱的填料是亲水而刚性,多孔球型,化学和机械性能都非常优异的聚合物。适用于以凝胶色谱的模式分析分离蛋白质、多肽、多糖、寡糖、DNA、RNA、水溶性的有机聚合物和其他水溶性大分子样品等。PW系列色谱柱的PH适用范围为2-12,可使用含有50%的混合有机溶剂为流动相,使用温度可达80℃(TSK-gel G-DNA-PW为50℃)。尽管大多数的PW填料呈微弱的负电性(约5~8μ eq/mL),但是对于分析分离非离子、阴离子和大多数的阳离子型样品没有任何影响。因为PW填料具有非常宽的分离范围,更加线性的校正曲线以及比SW色谱柱更加低得多的吸附特性,所PW色谱柱经常用于分离水溶性的合成聚合物。