主题：【分享】中药药典2010版现存需要采用薄层色谱法进行含量测定药材

体外培育牛黄
Tiwai Peiyu Niuhuang
BOVIS CALCULUS SATIVUS
    本品以牛科动物牛Bos taurus domesticus Gmelin的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成。
    【性状】  本品呈球形或类球形，直径0.5～3cm。表面光滑，呈黄红色至棕黄色。体轻，质松脆，断面有同心层纹。气香，味苦而后甘，有清凉感，嚼之易碎，不粘牙。
    【鉴别】  (1)取本品粉末少量，用清水调和，涂于指甲上，能将指甲染成黄色。
    (2)取本品粉末少许，用水合氯醛试液装片，不加热，置显微镜下观察：不规则团块由多数黄棕色或棕红色小颗粒集成，稍放置，色素迅速溶解，并显鲜明金黄色，久置后变绿色。
    (3)取本品粉末少量，加三氯甲烷1ml，摇匀，再加硫酸与浓过氧化氢溶液(30%)各2滴，振摇，溶液即显绿色。
    (4)取本品粉末0.lg，加盐酸1ml和三氯甲烷lOml，充分振摇，混匀，三氯甲烷液呈黄褐色，分取三氯甲烷液，加氢氧化钡试液5ml，振摇，即生成黄褐色沉淀。分离除去水层和沉淀，取三氯甲烷液约1ml，加醋酐1ml与硫酸2滴，摇匀，放置，溶液呈绿色。
    (5)取本品粉末lOmg，加三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸于，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品、去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷一乙酸乙酯一冰醋酸(15：7：5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
    【检查】  水分  不得过9.0%（附录ⅨH第一法）。
    游离胆红素  取本品细粉lOmg，精密称定，置5ml量瓶中，加三氯甲烷4ml，微温，放冷，加三氯甲烷至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，照紫外一可见分光光度法(附录V A)，在453nm波长处测定吸光度。吸光度不得过0.70。
    【含量测定】  胆酸  取本品细粉0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml．密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加20%氢氧化钠溶液lOml，加热回流2小时，冷却，加稀盐酸19ml调节pH值至酸性，用乙酸乙酯提取4次(25ml、25ml、20ml、20ml)，乙酸乙酯液均用同一铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过，滤液合并，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至lOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.48mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，精密吸取供试品溶液2μl、对照品溶液1μl与3μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷乙酸丁酯冰醋酸一甲酸(8：4：2：1)为展开剂，展距14～17cm，取出，晾干，喷以30%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法（附录Ⅵ B薄层色谱扫描法）进行扫描，波长：入s=380nm，入R=650nm，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。
    本品按干燥品计算，含胆酸(C24H4005)不得少于6.0%。
    胆红素  对照品溶液的制备  取胆红素对照品lOmg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含胆红素lOμg)。
    标准曲线的制备  精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置具塞试管中，加乙醇至9ml，各精密加入重氮化溶液（甲液：取对氨基苯磺酸0.lg，加盐酸1.5ml与水适量使成lOOml。乙液：取亚硝酸钠0.5g，用水溶解并稀释至lOOml，置冰箱内保存。临用时取甲液lOml与乙液0.3ml，混匀）1ml，摇匀，在15～20℃的暗处放置1小时，以相应的试剂为空白，照紫外一可见分光光度法(附录V A)，在533nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。
    测定法取本品细粉约lOmg，精密称定，置锥形瓶中，加三氯甲烷一乙醇(7：3)的混合溶液60ml、盐酸l滴，摇匀，置水浴上加热回流30分钟，放冷，转移至lOOml棕色量瓶中，容器用少量上述混合溶液洗涤，洗液并入同一量瓶中，加上述混合溶液至刻度，摇匀。精密量取上清液lOml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取3ml，置具塞试管中，照标准陆线的制各项下的方法，自“加乙醇至9ml”起，依法测定吸光度，从标准蓝线上读出供试品溶液中含胆红素的重量(mg)，计算，即得。
    本品按干燥品计算，含胆红素(C33H36N406)不得少于35.0%。
    【性味与归经】  甘，凉。归心、肝经。
    【功能与主治】  清心，豁痰，开窍，凉肝，息风，解毒。用于热病神昏，中风痰迷，惊痫抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疗疮。
    【用法与用量】  0.15～0.35g，多入丸散用。外用适量，研末敷患处。
    【注意】  孕妇慎用；偶有轻度消化遒不适。
【贮藏】  密闭，遮光，防潮，防压，室温保存。

枸  杞  子
Gouqizi
LYCII FRUCTUS
    本品为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。夏、秋二季果实呈红色时采收，热风烘干，除去果梗，或晾至皮皱后，晒干，除去果梗。
    【性状】  本品呈类纺锤形或椭圆形，长6～20mm，直径3～lOmm。表面红色或暗红色，顶端有小突起状的花柱痕，基部有白色的果梗痕。果皮柔韧，皱缩；果肉肉质，柔润。种子20～50粒，类肾形，扁而翘，长l_5～1.9mm，宽1～1.7mm，表面浅黄色或棕黄色。气微，味甜。
    【鉴别】  (1)本品粉末黄橙色或红棕色。外果皮表皮细胞表面观呈类多角形或长多角形，垂周壁平直或细波状弯曲，外平周壁表面有平行的角质条纹。中果皮薄壁细胞呈类多角形，壁薄，胞腔内含橙红色或红棕色球形颗粒。种皮石细胞表面观不规则多角形，壁厚，波状弯曲，层纹清晰。
    (2)取本品O.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯15ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材O.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(3：2：1)为展开剂。展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
    【检查】  水分  不得过13.O％(附录ⅨH第一法，温度为80℃)。
    总灰分  不得过5.O％(附录ⅨK)。
    重金属及有害元素  照铅、镉、砷、汞、铜测定法(附录ⅨB原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法)测定，铅不得过百万分之五；镉不得过千万分之三；砷不得过百万分之二；汞不得过千万分之二；铜不得过百万分之二十。
    【浸出物】  照水溶性浸出物测定法(附录X A)项下的热浸法测定，不得少于55.O％。
    【含量测定】 枸杞多糖  对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品25mg，精密称定，置250ml量瓶中，加水适量溶解，稀释至刻度，摇匀，即得(每1mI中含无水葡萄糖O.1mg)。
    标准曲线的制备  精密量取对照品溶液0.2ml、O.4ml、O.6ml、O.8ml、1.Oml，分别置具塞试管中，分别加水补至2.Oml，各精密加入5％苯酚溶液1m1，摇匀，迅速精密加入硫酸5ml，摇匀，放置10分钟，置40℃水浴中保温15分钟，取出，迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(附录V A)，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
    测定法  取本品粗粉约0.5g，精密称定，加乙醚100ml。加热回流1小时，静置，放冷，小心弃去乙醚液，残渣置水浴上挥尽乙醚。加入80％乙醇100ml，加热回流l小时.趁热滤过，滤渣与滤器用热80％乙醇30ml分次洗涤，滤渣连同滤纸置烧瓶中，加水150ml，加热回流2小时。趁热滤过，用少量热水洗涤滤器，合并滤液与洗液，放冷，移至250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置具塞试管中，加水1.Oml，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加入5％苯酚溶液1m1”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。
    本品按干燥品计算，含枸杞多糖以葡萄糖(C6H1206)计，不得少于1.8％，
    甜菜碱  取本品剪碎，取约2g，精密称定，加80％甲醇50ml，加热回流l小时，放冷，滤过，用80％甲醇：30m1分次洗涤残渣和滤器，合并洗液与滤液，浓缩至lOmI，用盐酸调节pH值至1，加入活性炭lg，加热煮沸，放冷，滤过，用水15m1分次洗涤，合并洗液与滤液，加入新配制的2.5％硫氰酸铬铵溶液20ml，搅匀，10℃以下放置3小时。用G；垂熔漏斗滤过，沉淀用少量冰水洗涤，抽干，残渣加丙酮溶解，转移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取甜菜碱对照品适量，精密称定，加盐酸甲醇溶液(O.5→100)制成每1m1含4mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，精密吸取供试品溶液5pl、对照品溶液3μl与6μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸(10：6：1)为展开剂，预饱和30分钟，展开，取出，挥干溶剂，立即喷以新配制的改良碘化铋钾试液，放置1～3小时至斑点清晰，照薄层色谱法(附录ⅥB薄层色谱扫描法)进行扫描，波长：入s=515nm，入R=590nm，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。
    本品按干燥品计算，含甜菜碱(C5H11NO2)不得少于0.30％。
    【性味与归经】  甘，平。归肝、肾经。
    【功能与主治】  滋补肝肾，益精明目。用于虚劳精亏，腰膝酸痛，眩晕耳鸣，阳萎遗精，内热消渴，血虚萎黄，目昏不明。
    【用法与用量】  6～12g。
    【贮藏】  置阴凉干燥处，防闷热，防潮，防蛀。

猪胆粉
Zhudanfen
SUIS FELLIS PULVIS
    本品为猪科动物猪Sus scrofadomesticn Brisson.胆汁的干燥品。
    【制法】  取猪胆汁，滤过，干燥，粉碎，即得。
    【性状】  本品为黄色或灰黄色粉末。气微腥，味苦，易吸潮。
    【鉴别】  照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取[含量测定]项下的供试品溶液及猪去氧胆酸对照品溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以新配制的异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(10：5：5：3：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。
【检查】  牛、羊胆  取牛、羊胆对照药材各O.1g，按[含量测定]项下的供试品溶液制备方法，自“加10％氢氧化钠溶液5ml”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取[含量测定]项下的供试品溶液和上述对照药材溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，同上述[鉴别]项下方法展开，显色。供试品色谱中，不得显与牛、羊胆对照药材相同的斑点。
还原糖  取本品10mg，加水2ml使溶解，滴加a萘酚乙醇溶液(1→50)数滴，摇匀，沿管壁缓缓加入硫酸约0.5ml，两液接界面不得显紫红色环。
    异性有机物  取本品10mg，加水2ml使溶解，离心或滤过，取不溶物，置显微镜下观察，不得有植物组织、动物组织或淀粉等。
    水分  取本品约O.3g，精密称定，照水分测定法(附录ⅨH第三法)测定，不得过10.O％。
    【含量测定】  取本品细粉约O.1g，精密称定，加10％氢氧化钠溶液5ml，120℃加热4小时，放冷，滴加盐酸调节pH值至2～3，摇匀。用乙酸乙酯振摇提取4次，每次10ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取猪去氧胆酸对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1m1含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，精密吸取供试品溶液1μl、对照品溶液1μl与3μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以新配制的异辛烷乙醚冰醋酸正丁醇一水(10：5：5：3：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(附录ⅥB薄层色谱扫描法)进行扫描，波长：入s=375nm，入R=650nm，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。
    本品按干燥品计算，含猪去氧胆酸(C24H4004)不得少于16.O％。
    【性味与归经】  苦，寒。归肝、胆、肺、大肠经。
    【功能与主治】  清热润燥，止咳平喘，解毒。用于顿咳，哮喘，热病燥渴，目赤，喉痹，黄疸，泄泻，痢疾，便秘，痈疮肿毒。
    【用法与用量】  O.3～O.6g，冲服或人丸散。外用适量，研末或水调涂敷患处。
    【贮藏】  密封，避光，置阴凉干燥处。

肯定是天然牛黄更好啊。不过现在市场上能看到的基本都是人工培育牛黄了。

薄层测定含量的方法越来越少了