实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8024779今日发帖：1 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
电泳仪
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【求助】SDS-Page蛋白条带总是很粗，求原因分析

浏览0 回复9 电梯直达
whrongjuan
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2011/03/21 13:34:24 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：10积分 状态： 未解决


最左边的是工作标准品，大家能不能帮我分析下，蛋白条带那么宽的原因呀，还有，怎么下面会有阴影呢，实在是思考不出来是什么原因。
我怀疑过是不是配胶的溶液PH不对？就重新配了，APS也是新配的。
是配胶时候没有混合均匀？就加大了摇匀的时间。怀疑是凝胶不充分？就35度环境下凝胶，但是都还是没有什么变化，真折磨人呀
求高人指点！
我来回答
该帖子作者被版主 省部重点实验室加 3积分， 2经验，加分理由：谢谢 分享
为您推荐
近期热榜
热门活动
专属顾问快速对接
获取验证码
立即提交
whrongjuan
whrongjuan
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2011/3/22 9:52:30 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
tianru的爸爸,进来帮忙解决下吧
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
机枪射手
z14753
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2011/3/22 16:32:14 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有好几年没有做过电泳了……
pH值确定准确吗？可以尝试增加浓缩胶的长度或者调整电压
该帖子作者被版主 gl19860312加 3积分， 2经验，加分理由：谢谢 分享
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
whrongjuan
whrongjuan
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2011/3/23 22:00:21 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
高手呀，救命啊，
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
tianru的爸爸
lxdongzi2003
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2011/4/6 14:38:55 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
现在应该是你的目标蛋白出现的问题：其它蛋白的结果还是可以看清楚的，并且蛋白条带分离的效果也可以，只是目标蛋白处有严重的问题——前展。

你的蛋白溶解性如何？如果不好的话，把整个体系的SDS加倍量（正常应该是0.1%的SDS，必要时加量，甚至更多）。如果很好，再检查盐浓度，你的样品盐浓度是否与电泳用样品缓冲液的盐浓度相当，差的多（高的多不好，低的多，也不好），就用透析或类似的方法换换液再电泳。

另外降低电压可以减少拖尾，一般至少要降低25%的电压才有显著效果。

必要时加一个BSA的样品作对照用（电泳效果对照），这样可以判断是样品有问题，还是电泳体系（电泳胶、样品缓冲液、电极缓冲液、电压电流与温度）有问题。

有问题再问，大家在一起总会有办法解决的。
该帖子作者被版主 gl19860312加 3积分， 2经验，加分理由：谢谢 分享
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
家有宝贝儿
menghandna
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2011/5/18 9:44:28 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
怀疑是样品本身的问题！
从胶上看有点象是分离纯化的过程中间品，样品本身的pH，离子强度有会有影响。建议在问题不明确的时候，即使不用标准品，也要加一个对照品，如BSA等，这样才能确定是样品问题，还是电泳的问题了。
该帖子作者被版主 gl19860312加 2积分， 2经验，加分理由：谢谢 分享
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
zhbvssong
zhbvssong
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2011/12/25 9:21:24 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我做的不多；不过建议还是把电压降低一下，看看效果如何再说
说不定是由于小问题造成的
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
renmeng88711
renmeng88711
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/1/12 14:26:16 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看你的胶  有点皱眉  应该是胶的浓度不太均匀  然后  你的样品脱盐了么  或者是你的样品溶解性不太好  你上面那块胶是什么条件跑的  你跑的也是不连续SDS-PAGE电泳么  你可以换一下电泳缓冲液  再试试
该帖子作者被版主 gl19860312加 2积分， 2经验，加分理由：O(∩_∩)O谢谢 交流
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
renmeng88711
renmeng88711
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/1/13 11:22:20 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品条带粗  可以用不连续试一下  再说了  你可以减小上样量的  你上多少微升啊
该帖子作者被版主 gl19860312加 2积分， 2经验，加分理由：O(∩_∩)O谢谢 交流
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
okwqj
okwqj
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/1/17 13:45:23 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有标准品和样品对照可以明确一点，出现以上情况不是样品本身原因。可能原因有以下：
1.可以肯定的一点你的上样量过大。
2.再确定一下上样缓冲液是不是有问题？
3.确定分离胶是否充分凝好？
4.也可能像“tianru的爸爸”说的，你的样品盐浓度是否与电泳用样品缓冲液的盐浓度相当。
该帖子作者被版主 gl19860312加 3积分， 2经验，加分理由：谢谢 交流( ⊙ o ⊙ )啊！
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
猜你喜欢 最新推荐 热门推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁