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主题：【讨论】求助关于制备液相的一个问题~

浏览0 回复9 电梯直达
幽灵龙猫
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发表于：2011/05/18 11:15:12 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近用制备液相分离一个样品
会出现这样的现象：
第一针进去，分离度非常好，但是第二针会差一些
一天之内，分离度会越来越不好，最后都不能基线分离了
流动相比例已经很低了，不能再拖了
请高手指点，这是什么原因？
制备柱是国外某品牌(250x20mm, 10μm)
该帖子作者被版主 月旭科技--小S加 10积分， 2经验，加分理由：欢迎提出这么正宗的讨论话题！
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阿三
junqiwudi
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2011/5/18 11:30:12 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主是不是你样品太脏啦 把柱子给污染了 （别恨我）
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2011/5/18 11:30:36 Last edit by junqiwudi
幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2011/5/18 12:12:20 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 阿三(junqiwudi) 发表:
楼主是不是你样品太脏啦 把柱子给污染了 （别恨我）

不会吧，样品应该没问题，过完凝胶，然后ODS也过完
流动相很好溶解，之后过滤膜才制备
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头像更新中，请稍候…
kaikaifeng
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2011/5/18 12:19:11 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
液相累了。。。越做越疲劳，越分越差
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雪妖
czj_1027
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2011/5/18 13:38:27 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱效是不是越来越低呢，有图谱能看一下吗？分离度冲洗以后能恢复吗？
样品溶剂的PH值是不是和流动相之间相差很大
样品有点脏这也是可能的，有些是强保留物质在柱头端累积，冲洗下后这种物质就少了，第二天就好分离度较好

进样体积是不是太大了，你把样品浓度增加，进样体积减小，流动相纯度是不是太低了
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2011/5/18 13:40:08 Last edit by czj_1027
幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2011/5/18 13:55:54 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 雪妖(czj_1027) 发表:
柱效是不是越来越低呢，有图谱能看一下吗？分离度冲洗以后能恢复吗？
样品溶剂的PH值是不是和流动相之间相差很大
样品有点脏这也是可能的，有些是强保留物质在柱头端累积，冲洗下后这种物质就少了，第二天就好分离度较好

进样体积是不是太大了，你把样品浓度增加，进样体积减小，流动相纯度是不是太低了

谢谢雪版主的指点
谱图我没有，因为是做制备没保存，就是查看基线然后接峰，没采集
分离度在冲洗之后，第二天开始能恢复，之后又变差了
我的化合物含有酸性基团，我是加了0.1‰的TFA，如果不加酸，拖尾很严重
我用35%甲醇水制备，样品水溶性很强，所以样品用35%甲醇溶解后可能有点稀
半制备柱(250x10mm, 4.6μm)，我进样0.4mL貌似体积大了点
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子不曰
mispring
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2011/6/8 20:05:09 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
WO猜想 没分开的原因可能是前面的峰没出完吧，时间加长些，进样量小点，再就是溶剂极性减低些
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子不曰
mispring
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2011/6/8 20:05:48 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不知道您解决没有，我觉得就是拖一拖 脱开 不要相互干扰
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幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2011/6/9 16:15:23 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 子不曰(mispring) 发表:
不知道您解决没有，我觉得就是拖一拖 脱开 不要相互干扰

问题已解决，按照雪版主的建议，进行处理样品
样品浓度太小，进样量大了，相反，浓度大些，但进样量小些，分离度就变好了
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幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2011/6/9 16:16:12 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
还有就是这个样品所含的两个化合物均有酸性，流动相在比例适当降低的同时加入了一定量的酸，效果非常好。
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