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主题：【求助】HPLC检测样品遇到问题了。怎么解决？？

浏览0 回复9 电梯直达
jessicaxin20
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发表于：2011/06/15 10:21:35 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请高手给分析原因，给出改进方案

这是我今天跑的液相的图谱，根据文献用了三种方法，但是图谱都不理想，刚接触，也不知道该怎么改进，还请高手指点迷津。我的溶剂是乙酸乙酯。附件是我的图谱，其中样品-1和样品-2是用的等度洗脱，流动相是乙腈和氯仿，样品1是92:8，样品2是95:5,方法二是用的乙腈和乙酸乙酯梯度洗脱，方法三是乙腈：水=88;12作为A相，B相是乙酸乙酯，也是梯度洗脱。前三个图谱都有倒峰而且基线漂移很严重，第四个感觉直接就没分开，还请高手们不吝赐教，小弟感激万分啊！

样品1 乙腈氯仿=98:2等度洗脱



样品2 乙腈氯仿=95:5等度洗脱



方法二 乙腈乙酸乙酯梯度洗脱



方法三 乙腈水和乙酸乙酯梯度洗脱

该帖子作者被版主 boboenid007加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励提问！
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hudayaoxue
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2011/6/15 10:26:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

　　你是用正相柱还是反相柱？为什么用些奇怪的流动相？

　　一般反相柱用甲醇或乙醇与水，正相柱用正己烷与异丙醇．

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有水有渝
xky0230699
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2011/6/15 10:46:33 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你检测的是什么样品，要这么弱极性的流动相？
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jessicaxin20
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2011/6/15 15:44:42 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
你检测的是什么样品，要这么弱极性的流动相？


样品是脂溶性的，应该是极性比较弱。

类胡萝卜素。主要是C40分子，中央是多聚烯链

用的是反相柱，流动相是参考的别人的方法，我测的是类胡萝卜素，可能这种物质本身极性就很差吧，我也不懂。

流动相是参考的别人的方法，我测的是类胡萝卜素，可能这种物质本身极性就很差吧，我也不懂。

柱子是C18反相柱，填料是硅胶，我进了10ul的样，可能提取方法待改进，谢谢解答！
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xizhi
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2011/6/16 8:41:25 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用针对弱极性的CN柱试试
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hudayaoxue
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2011/6/16 8:48:26 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

  极性比较弱的话，用反相C18柱或C8柱都可以。

  看一看类胡萝卜素的溶解性，首选乙腈：水体系。从乙腈较大的比例开始摸索。如：95％乙腈、90％、80％等。一般可以每次跳10个百分点。如果在乙腈中溶解性不是太好，可以选择乙腈与甲醇混合为有机相，与水相混合。肯定是可以出来的。这个物质应该不是太难。

  另外，对于参考文献，一方面是要“参”，即参照人家的；另一方面要“考”，即要思考自己的。
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小Ｐ孩
yuqing22
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2011/6/16 12:01:57 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
C18反相柱一般不用氯仿，乙酸乙酯做流动相。进样的样品要处理干净，然则会影响分析结果
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1818
xyhdcm2002
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2011/6/16 14:59:36 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用氨基柱或许会好些......
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有水有渝
xky0230699
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2011/6/18 10:17:22 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主把你的梯度过程写清楚一下。
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enternet
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2011/6/18 11:12:09 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品不用乙酸乙酯溶解，应挥干后，用甲醇或乙腈来溶解，因为乙酸乙酯在紫外区有吸收，你查一下截止波长。流动相也不能用乙酸乙酯，一样带来溶剂的背景干扰。但你用的波长是450，你自己再考虑一下。
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