主题：【讨论】【仪器使用】酶标仪的原理及使用方法

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zhang8826857

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发表于：2011/09/27 21:12:08 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

今天使用了一下酶标仪，光知道操作，但是不知道原理，所以从网上查了查，正好和大家分享下^_^
酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。
　特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
　　检测单位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，OD值与光强度成下述关系：
E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。
　　OD值由下述公式计算：
　　E＝OD=C×D×E
　　C为检测物的浓度
　　D为检测物的厚度
　　E为摩尔因子
　　在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。
　　但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。
　　Anthos 酶标仪检测值计算
　　仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为 0％，没有检测物的透光值为100％。则实际检测中，检测物的透光值均在 0％一100％之间。透光值
的计算如下：
　　T＝（Meas―Min）／（Max―Min）
　　其中T为透光值， Meas为检测的二进位数值， Min为在 0％的情况下检测的二进位数值， Max为在100％的情况下检测的二进位数值，举例如下：
　　MaX=3600 Mn=20 Meas＝30
　　T=（30-20）/3600-20)＝0．0028
　　OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552
　　Anthos 酶标仪的中心定位
　　仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时，仪器其实要进行35个点的测量，选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。
　　光源的参照通道
　　参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。
　　酶标仪的用途和其它提示
　　用于ELISA试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。
　　质量控制
　　质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制。
　　空白校正
　　有一些试剂盒的说阴书将空白孔设置为空气，其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置的，请按照试剂盒的说明书要求进行。
　　检测结果的解释
　　由于有相当多的因素会影响检测的结果，如不同的酶标板，检测试剂的体积，都会造成OD值的不，因此，只有使用同一酶标板反应的试剂检测结果才能比较和分析。对结果的临床解释请依照试剂盒的说明书进行。
酶标仪的使用注意事项
1、工作环境
　　酶标仪是一种精密的光学仪器，因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。根据DIN VDE 0871条例，仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置。依据DIN 45 635 －19条例：
　　仪器应放置在低于40分贝的环境下。
　　为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。
　　操作时环境温度应在15℃－40℃之间，环境湿度在15％－85％之间。
　　操作电压应保持稳定。
　　操作环境空气清洁，避免水汽，烟尘。
　　保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。
2、操作注意事项
　　酶标仪的功能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果，因此要得到准确结果，试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯，会造成较大误差。在酶标仪的操作中应注意以下事项：
　　使用加液器加液，加液头不能混用。
　　洗板要洗干净。如果条件允许，使用洗板机洗板，避免交叉污染。
　　严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。
　　在测量过程中，请勿碰酶标板，以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。
　　请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成后请洗手。
　　如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害，请严格按照试
　　剂盒的操作说明，以防对操作人员造成损害。
　　如果仪器接触过污染性或传染性物品，请进行清洗和消毒。
　　不要在测量过程中关闭电源。
　　对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。
　　使用后盖好防尘罩。
　　出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。

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