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主题：【求助】请问有谁做过GC-MS上样前的衍生化实验吗？

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yanz
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发表于：2011/11/23 20:03:43 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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本人想提取植物的代谢物做GC-MS分析，上样前需要做衍生化处理，但是又没做过这种实验，有很多不懂的地方想请教各位高人。参考的文献在附件里面。
1.加入核糖醇作为内标就是为了用来定量吗？有无别的用处？
2.MSTFA中加入保留指数的标准混合物是定性用吗？定性我只知道和数据库比对，加这个的用处是什么呢？更准确的定性吗，如果是的话又如何利用如何计算呢？
3.上述的保留指数的标准混合物，文章中用到的是饱和脂肪酸甲酯系列的混合物, 网上一查有很多种，该如何选择呢？
4.衍生化时各种试剂，如甲氧氨基盐酸盐、MSTFA等都需要色谱纯吗？对试剂还有没有什么别的要求？
5.衍生化的操作过程还有一些其他的注意事项吗？
如您知道答案可发我邮箱yanyan4909@126.com,也可留言。
希望各位高手不吝赐教，感激不已！
附件：
Gas chromatography mass spectrometry–based.pdf
推荐答案：ins0mnia2010回复于2011/11/24
1）内标标准曲线法，核糖醇可能是用于校正进样误差
2 ）GC上定性的方法，1相对保留时间定性，2保留指数定性，3质谱定性，前两者是需要标准品，第二种方法的保留指数的计算是通过同一操作条件下的样品与正构烷烃或一系列的饱和脂肪酸甲酯的相对位置来计算的。
3）饱和脂肪酸甲酯混标的沸程越宽，样品可用于保留指数定性的物质也越多，但同时又受到仪器与色谱条件的限制
4）可以做个方法空白，排除杂质的影响，对衍生化试剂要求是很高的，毕竟每个样品处理都需要，建议MSTFA买国外的，Alfar，sigma的都行
5）先肟化，再硅烷化，硅烷化保证样品吹干，进样针润洗过程别用甲醇，乙醇之类含羟基的物质。
补充答案：

砂锅粥回复于2011/11/24

我只能回答你第一个问题，其它没接触过。
加入内标是为了让定量更加准确。如果没加内标的话，GC-MS这种仪器的重现性不是很好。内标可以校正进样量的误差，特别是手动进样。比如加了内标之后，进样量1微升变成2微升的话也基本不影响定量结果；如果不加内标的话结果可能就变成原来的2倍。

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砂锅粥
czcht
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2011/11/24 8:19:58 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我只能回答你第一个问题，其它没接触过。
加入内标是为了让定量更加准确。如果没加内标的话，GC-MS这种仪器的重现性不是很好。内标可以校正进样量的误差，特别是手动进样。比如加了内标之后，进样量1微升变成2微升的话也基本不影响定量结果；如果不加内标的话结果可能就变成原来的2倍。
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zyx1108
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2011/11/24 10:17:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
保留指数的标准混合物 没接触过。
一般做衍生化试剂都是从外面直接买来用的，1.5或者2mL的小瓶子。
衍生化的时候除水要彻底些，防止衍生化试剂遇水分解。
该帖子作者被版主 czcht加 2积分， 2经验，加分理由：谢应助
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七宝
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2011/11/24 10:23:06 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
衍生化一般都是硅烷化，一般建议使用BSTFA。
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ins0mnia2010
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2011/11/24 10:55:04 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1）内标标准曲线法，核糖醇可能是用于校正进样误差
2 ）GC上定性的方法，1相对保留时间定性，2保留指数定性，3质谱定性，前两者是需要标准品，第二种方法的保留指数的计算是通过同一操作条件下的样品与正构烷烃或一系列的饱和脂肪酸甲酯的相对位置来计算的。
3）饱和脂肪酸甲酯混标的沸程越宽，样品可用于保留指数定性的物质也越多，但同时又受到仪器与色谱条件的限制
4）可以做个方法空白，排除杂质的影响，对衍生化试剂要求是很高的，毕竟每个样品处理都需要，建议MSTFA买国外的，Alfar，sigma的都行
5）先肟化，再硅烷化，硅烷化保证样品吹干，进样针润洗过程别用甲醇，乙醇之类含羟基的物质。
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yanz
yanz4909
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2011/11/24 15:00:31 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 czcht(czcht) 发表:
我只能回答你第一个问题，其它没接触过。
加入内标是为了让定量更加准确。如果没加内标的话，GC-MS这种仪器的重现性不是很好。内标可以校正进样量的误差，特别是手动进样。比如加了内标之后，进样量1微升变成2微升的话也基本不影响定量结果；如果不加内标的话结果可能就变成原来的2倍。


嗯，谢谢你！这个明白了~
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yanz
yanz4909
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2011/11/24 15:57:49 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ins0mnia2010(ins0mnia2010) 发表:
1）内标标准曲线法，核糖醇可能是用于校正进样误差
2 ）GC上定性的方法，1相对保留时间定性，2保留指数定性，3质谱定性，前两者是需要标准品，第二种方法的保留指数的计算是通过同一操作条件下的样品与正构烷烃或一系列的饱和脂肪酸甲酯的相对位置来计算的。
3）饱和脂肪酸甲酯混标的沸程越宽，样品可用于保留指数定性的物质也越多，但同时又受到仪器与色谱条件的限制
4）可以做个方法空白，排除杂质的影响，对衍生化试剂要求是很高的，毕竟每个样品处理都需要，建议MSTFA买国外的，Alfar，sigma的都行
5）先肟化，再硅烷化，硅烷化保证样品吹干，进样针润洗过程别用甲醇，乙醇之类含羟基的物质。

谢谢你！GC定性的前两种方法是不是得利用公式计算呀，有软件自动分析吗？因为如果出峰数很多的话手动算好像很费时呀……另外，那个混标有很多种，不同的碳数，在选购时如何参考呢？
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