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主题：【原创】固相萃取技术知识，不断更新中

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2012/2/14 9:39:12 23楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
4 ProElut 填料技术指标
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2012/2/15 14:13:51 24楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
固相萃取方法的建立



固相萃取技术具有较强的方法依赖性，对于具体的分析项目需要建立具体的操作方法。

建立固相萃取方法可以按下面的思路依次进行：

1 明确目的和要求，综合分析目标物、样品基质和分析方法

2 设计初步的固相萃取方法

3 进行试验，优化方法

4 对最终方法进行验证


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2012/2/15 14:34:51 25楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
2.1 吸附剂的选择



(1) 根据目标化合物性质选择



(2) 根据基质性质选择



固相萃取技术最重要的目的在于通过固相萃取柱将目标化合物和主要干扰物分离开，从而实现净化目的，因而掌握目标化合物和主要干扰物的性质并找出差异才能成功选出合适的固相萃取柱将二者加以分离。以上的情况远不能涵盖可能的基质和分析项目，涉及到其他具体实例，操作者依据“区分目标化合物和主要干扰物的” 原则进行选择往往能够取得理想效果。



2.2 固相萃取柱规格的选择



SPE 吸附剂所能吸附的化合物质量是有限的，在最佳条件下，一定质量吸附剂所能保留化合物的总质量被称为吸附剂的吸附容量。对于离子交换吸附剂，吸附容量处于0.5-1.5meq/g 之间；其他吸附剂则不超过50 mg/g。需要指出的是，吸附容量是目标物和部分干扰物的总和，一旦超出这一数值，就面临目标物“穿透” SPE 柱的危险。


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2012/2/16 16:56:50 26楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3 固相萃取方法的优化



固相萃取方法的优化的思路



 

  填料( 固定相) ：分析目标物的基团特征，并通过比较找出目标物与干扰物在溶解性方面的差异，选出几种合适的固相萃取填料，通过对比实验，选出最佳填料；SPE 柱规格：根据样品量估计所需填料质量，避免“穿透现象” ；淋洗溶液和洗脱溶液：在保证回收率合格的情况下，增加淋洗液洗脱强度、降低洗脱液洗脱强度。

    其中“淋洗溶液和洗脱溶液的优化” 需要一些技巧，下面详细阐述一下。

    在SPE 操作中，上样以后部分干扰物会与目标化合物同时保留在吸附剂上，这些干扰物中的一部分与吸附剂的作用力弱于目标化合物，而另一部分则强于目标化合物，所以在保证回收率合格的情况下，增加淋洗液洗脱强度可以最大可能地洗掉保留弱的干扰物，降低洗脱液洗脱强度则尽最大可能地使保留强的干扰物留在吸附剂上。

    对于反相模式，可将目标化合物的水溶液上样（11 个对比），然后分别用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100% 的甲醇水溶液洗脱，分别收集洗脱液分析，建立淋洗曲线，找出目标化合物被洗脱时的溶剂体系，淋洗液中甲醇的含量应稍低于目标化合物恰好被洗脱时的溶剂体系，而洗脱液中甲醇的含量应稍高于目标化合物恰好被完全洗脱时的溶剂体系；当纯甲醇不能洗脱目标化合物时，应试验甲醇- 甲基叔丁基醚混合溶液的洗脱曲线；对于某些既不溶于水也不溶于甲醇的离子型化合物，可以在溶剂体系中加入酸或碱。

  于正相体系，可将目标化合物的正己烷溶液上样（11 个对比），然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100% 的正己烷甲基叔丁基醚溶液洗脱，分别收集洗脱液分析，建立淋洗曲线，找出目标化合物被洗脱时的溶剂体系，淋洗液中甲基叔丁基醚的含量应稍低于目标化合物恰好被洗脱时的溶剂体系，而洗脱液中甲基叔丁基醚的含量应稍高于目标化合物恰好被完全洗脱时的溶剂体系。

  图5-2 为氯霉素在ProElut PLS 上的淋洗曲线（反相模式），由图可知当甲醇水溶液浓度低于30% 时，氯霉素完全没有被洗脱，所以将淋洗液设定为30% 甲醇水溶液可以最大限度地去除保留弱于氯霉素的干扰物；当甲醇水溶液浓度高于60% 时，洗脱液中氯霉素的回收率超过95%，因而60% 甲醇水溶液足以洗脱氯霉素而又最大限度地使保留强的化合物存留在吸附剂上。




  在反相固相萃取中，甲醇和乙腈的水溶液是最常见的洗脱液，然而洗脱液中的水往往不利于洗脱液的浓缩，此时为了方便浓缩洗脱液还是应使用甲醇和乙腈，这可能会使洗脱液中干扰物的种类增加；如果分析前不必浓缩，则不必改变；对于正相模式，由于操作过程使用的溶剂几乎不涉及水，所以不必有此顾虑。

4 固相萃取方法的验证

  经过优化后的固相萃取方法需要经过验证才能成为最终方法。验证的方法就是进行添加回收试验，以添加回收率、相对标准偏差和有无和目标物重叠或接近的干扰物作为评价指标。

原则上添加回收率应处于80%-120% 之间，当多种目标物同时检测时，这一指标可适当放宽。
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2012/2/16 16:57:24 Last edit by diamonsil-girl
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2012/2/23 13:48:05 27楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

  固相萃取常见问题及解决办法



以下是固相萃取操作中常见的问题

1 目标物没有回收或回收率低；

2 萃取重现性差；

3 净化不理想；

4 SPE 柱流速降低或阻塞。
1 目标物没有回收或回收率低

在一次完整的SPE 操作中，目标化合物可能会存在于样品溶液流出液、淋洗液、洗脱液或吸附剂中，当“目标物没有回收或回收率低” 现象发生时，可向样品溶液加入标液，然后进行完整的SPE 操作并将样品流出液、淋洗液和洗脱液分别收集并分析，首先确定目标化合物存在于哪一部分，进而确定问题来自下列哪一环节：

A 目标物在吸附剂上的保留不足；

B 目标物未被完全洗脱；

C 其他环节

1.1 超过5% 的目标化合物出现在样品流出液或淋洗液

当超过5% 的目标化合物出现在样品流出液或淋洗液时即可断定“目标化合物在吸附剂上的保留不足”。

下面是具体原因的改进办法：


middle



1.1 目标化合物在样品溶液流出液和洗脱液中未出现，而洗脱液中少量出现或未出现

当目标化合物在样品溶液流出液和淋洗液中未出现而洗脱液中仅有少量或未出现时，可判断“目标物未被完全洗脱”。

下面是具体原因的改进办法：

middle



1.3 目标化合物在洗脱液中正常出现

如果目标化合物在洗脱液中正常出现，那么回收率不足的问题应该来自样品前处理的其他环节。

middle



2  回收率重现性差

middle

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2012/2/23 13:49:05 Last edit by diamonsil-girl
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2012/2/24 13:21:30 28楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3 净化效果不理想

3.1 净化模式的改进

通常而言采用保留目标化合物的模式比保留杂质的模式净化效果好，如果正在分析的项目为某一种或某一类化合物分析，最好是采用保留目标化合物的净化模式；举一个简单的例子，同样是分析蔬菜中的多菌灵和噻菌灵( 一类碱性农药)，使用阳离子交换柱可以专一性地保留这些农药，使它们基本与干扰物完全分离，而使用正相吸附剂或石墨化碳黑进行保留干扰物的操作仅能把主要的干扰物除去，仍有较多干扰物存留。另外，如果不止一种SPE 柱可用于目标化合物的净化时，应挑选选择性好的吸附剂；选择性方面，离子交换＞正相＞反相。

3.2 淋洗液和洗脱液的优化

对于反相模式和正相模式，应在不影响回收率的前提下，增大淋洗液洗脱的强度并降低洗脱液的洗脱强度。

对于反相模式，可将目标化合物的水溶液上样，然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100% 的甲醇水溶液洗脱，分别收集洗脱液分析，建立淋洗曲线，找出目标化合物被洗脱时的溶剂体系，淋洗液中甲醇的含量应稍低于目标化合物恰好被洗脱时的溶剂体系，而洗脱液中甲醇的含量应稍高于目标化合物恰好被完全洗脱时的溶剂体系；当纯甲醇不能洗脱目标化合物时，应试验甲醇- 甲基叔丁基醚混合溶液的洗脱曲线；对于某些既不溶于水也不溶于甲醇的离子型化合物，可以在溶剂体系中加入酸或碱。

对于正相体系，可将目标化合物的正己烷溶液上样，然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100% 的正己烷甲基叔丁基醚溶液洗脱，分别收集洗脱液分析，建立淋洗曲线，找出目标化合物被洗脱时的溶剂体系，淋洗液中甲基叔丁基醚的含量应稍低于目标化合物恰好被洗脱时的溶剂体系，而洗脱液中甲基叔丁基醚的含量应稍高于目标化合物恰好被完全洗脱时的溶剂体系。

3.3 对SPE 柱进行合理的处理

SPE 柱中的吸附剂可能存在少量干扰物，有效地活化可以避免这些干扰物进入洗脱液，活化溶液应选择整个操作中洗脱强度最强的溶剂体系；在反相模式中，从样品溶液到洗脱液主要涉及0%-100% 甲醇水溶液，所以活化溶液应选纯甲醇，当目标化合物需要用甲醇- 甲基叔丁基醚混合液洗脱时，活化溶液应选甲基叔丁基醚；在正相模式中，从样品溶液到洗脱液主要涉及0%-100% 正己烷- 甲基叔丁基醚溶液，所以活化溶液应选纯甲基叔丁基醚。

4 流速过低
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