实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8042731今日发帖：591 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
厂商论坛
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【原创】CNW Athena C18-wp液相色谱柱对新型瘦肉精-苯乙醇胺A的分离

浏览0 回复26 电梯直达
vcningmeng
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2012/02/28 15:55:57 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被reagentlife设置为精华；
新型瘦肉精苯乙醇胺A，属于β-激动剂的一种，具有同瘦肉精（莱克多巴胺、克伦特罗等）相同的作用和效果。苯乙醇胺A已被农业部第1519号公告列为禁止在饲料和动物饮水中使用的物质。



中文名：苯乙醇胺A

英文名：2-(4-(nitrophenyl)butan-2-ylamino)-1-(4-methoxyphenyl)ethanol

化学命名：2-[4-（4-硝基苯基）丁基-2-基氨基]-1-（4-甲氧基苯基）乙醇

分子式：C19H24N2O4

分子量：344.17

目前主要以高效液相色谱串联质谱法（LC-MS）对该物质进行检测（农业部1486号公告-1-2010），我公司针对HPLC用户开发了苯乙醇胺A高效液相色谱（HPLC-UV）检测方法，同时对现有的LC-MS法进行了调整！

一．样品前处理

1.        饲料基质：准确称取1g（精确到0.001g）样品于50mL离心管，加入甲醇10mL，漩涡混合30s后超声提取20min（期间再漩涡2次，每次10s），4000r/min离心8min，取上清液过CNW Poly-Sery MCX混合型阳离子交换SPE小柱（MCX小柱预先用3mL甲醇、3mL水活化），用3mL水、3mL甲醇依次淋洗，近干后用3mL5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液。将洗脱液于50℃氮吹至干，用甲醇定容至1mL，过0.22μm有机滤膜，上机分析。

2.        猪肉基质：准确称取1g（精确到0.001g）样品于50mL离心管，加入0.2mol/L乙酸钠缓冲液（乙酸调pH约5）8mL，充分漩涡混合，再加入50μLβ-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶，充分漩涡混合后于37℃恒温箱酶解12h。4000r/min离心15min，取上清液加入0.1mol/L高氯酸3mL，漩涡混合均匀后用高氯酸调pH约1，4000r/min离心15min后将上清液转移到50mL离心管中，用10mol/L 氢氧化钠溶液调pH约11。加入饱和氯化钠溶液10mL和甲醇10mL，漩涡混合30s后超声提取20min（期间再漩涡2次，每次10s），4000r/min离心8min，取上层有机相过CNW Poly-Sery  MCX混合型阳离子交换SPE小柱，后续步骤同饲料基质。

二．HPLC分析方法

1.HPLC色谱条件

色谱柱：CNW Athena C18-WP，2.1×150mm,3um（LAEQ-211573）

柱温：25℃

流动相：0.01%二乙胺水溶液（pH7.8）：乙腈=60:40

流速：0.2mL/min

进样量：10μL

检测器波长：UV 226nm



2.苯乙醇胺A标准曲线

配制0.1ppm,0.2ppm.0.5ppm.1.0ppm苯乙醇胺A标准溶液，依次上HPLC分析，得到浓度和峰面积的标准曲线如下：





苯乙醇胺A浓度与峰面积在0.1ppm~1.0ppm范围内线性良好，标准曲线方程Y=101632X+0，相关系数1.0000！

饲料基质加标0.1ppm,0.2ppm,0.6ppm回收率在81%-104%

猪肉基质加标0.1ppm,0.2ppm,0.6ppm回收率在78%-105%,
为您推荐
近期热榜
热门活动
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
选参数 看心得 找厂商 查方案
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
vcningmeng
vcningmeng
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/2/28 16:10:11 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
三．LC-MS分析方法

1.LC-MS色谱及质谱条件

色谱柱：CNW Athena C18-WP，2.1×150mm,3um（LAEQ-211573）

柱温：25℃

流动相：0.01%二乙胺水溶液（pH7.8）：乙腈=40:60

流速：0.2mL/min

进样量：10μL

离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正离子扫描

检测方式：选择反应监测SRM

2.分析图谱

I．苯乙醇胺A标准溶液（0.01ppm）色谱图

组分              保留时间（min）                  峰面积

苯乙醇胺A        7.24                    1356

II．苯乙醇胺A标准溶液（0.01ppm）全扫描质谱图



III．苯乙醇胺A标准溶液（0.01ppm）母离子（m/z 345）二级子离子扫描质谱图

IV. 饲料中0.01ppm苯乙醇胺A加标

苯乙醇胺A        7.25                    1188



V. 猪肉中0.01ppm苯乙醇胺A加标





组分              保留时间（min）                  峰面积

苯乙醇胺A        7.37                    1359

3.苯乙醇胺A标准曲线

配制0.01ppm,0.02ppm.0.05ppm.0.10ppm苯乙醇胺A标准溶液，依次上LC-MS分析，得到浓度和峰面积的标准曲线如下：

苯乙醇胺A浓度与峰面积在0.01ppm~0.1ppm范围内线性良好，标准曲线方程Y=110154X+155.25，相关系数0.9977！

饲料基质加标0.01ppm,0.02ppm,0.06ppm回收率在94%-118%

猪肉基质加标0.01ppm,0.02ppm,0.06ppm回收率在106%-109%



讨论: 农业部1486号公告-1-2010中所用LC-MS方法用的是甲酸调节PH值，上质谱，从实验结果来看，应该是有问题的，如果用甲酸调节PH以后，苯乙醇胺A全部质子化，在C18上面是没有保留的；实验过程也证实的确是这样。所以在实验过程中，我们调整了实验方法，改用二乙胺调节PH值。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
arvid2007
arvid2007
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/2/29 20:35:26 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
HPLC法的相关系数为1.0，这么好
两种方法的回收率都蛮高的
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
冰火女孩
xuwanxiu2006
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/2/29 22:06:41 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
老师真是高人啊，实验做的真好。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
童话仙子
liling123436
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/3/2 22:01:03 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
版主做的啊？这么强啊？看到实验室的师姐师兄们没这么夸张的线性关系，能做如此好，很厉害的。是哪的液相，waters的吗？？
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
童话仙子
liling123436
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/3/2 22:02:14 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
还有这个原创都是安谱的仪器和耗材做的吗？？
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
vcningmeng
vcningmeng
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/3/3 9:26:49 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 童话仙子(liling123436) 发表:
版主做的啊？这么强啊？看到实验室的师姐师兄们没这么夸张的线性关系，能做如此好，很厉害的。是哪的液相，waters的吗？？

呵呵，同事做的，我给了点意见，液相是小日本岛津的，毕竟经济实惠，能满足工作要求就可以了
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
童话仙子
liling123436
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/3/3 9:31:35 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 vcningmeng(vcningmeng) 发表:
原文由 童话仙子(liling123436) 发表:
版主做的啊？这么强啊？看到实验室的师姐师兄们没这么夸张的线性关系，能做如此好，很厉害的。是哪的液相，waters的吗？？

呵呵，同事做的，我给了点意见，液相是小日本岛津的，毕竟经济实惠，能满足工作要求就可以了

恩，说的也是，不过做的曲线很理想。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
vcningmeng
vcningmeng
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/3/3 9:32:50 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 童话仙子(liling123436) 发表:
还有这个原创都是安谱的仪器和耗材做的吗？？

是的，当然仪器不是安谱的，其他都是，其实发这个原创我是有点小小得意的，因为发现了推荐方法里面有个错误：用甲酸去调PH值，其实实验做下来有问题，完全没有保留，苯乙醇胺A完整质子化，改成二乙胺后，保留正常
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
童话仙子
liling123436
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/3/3 9:36:34 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 vcningmeng(vcningmeng) 发表:
原文由 童话仙子(liling123436) 发表:
还有这个原创都是安谱的仪器和耗材做的吗？？

是的，当然仪器不是安谱的，其他都是，其实发这个原创我是有点小小得意的，因为发现了推荐方法里面有个错误：用甲酸去调PH值，其实实验做下来有问题，完全没有保留，苯乙醇胺A完整质子化，改成二乙胺后，保留正常

嘻嘻，哪的确如此，能发现这个小错误就是最大的发现了的。推荐方法是不是国标？？还是一般的SOP？
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
vcningmeng
vcningmeng
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2012/3/3 9:45:43 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 童话仙子(liling123436) 发表:
原文由 vcningmeng(vcningmeng) 发表:
原文由 童话仙子(liling123436) 发表:
还有这个原创都是安谱的仪器和耗材做的吗？？

是的，当然仪器不是安谱的，其他都是，其实发这个原创我是有点小小得意的，因为发现了推荐方法里面有个错误：用甲酸去调PH值，其实实验做下来有问题，完全没有保留，苯乙醇胺A完整质子化，改成二乙胺后，保留正常

嘻嘻，哪的确如此，能发现这个小错误就是最大的发现了的。推荐方法是不是国标？？还是一般的SOP？

最早的农业部推荐的方法
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
手机版： CNW Athena C18-wp液相色谱柱对新型瘦肉精-苯乙醇胺A的分离
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁