主题：【分享】色谱峰的前沿与拖尾问题

峰拖尾可能的原因 : 解 决 方 法 1.柱超载 : 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 2.峰干扰 : 清洁样品,调整流动相 3.硅羟基作用 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相 PH 值,钝化样品 4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 6.死体积或柱外体积过大 : 连接点降至最低,对所有连 接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 7.柱效下降 : 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。 可能两种情况：1.柱效低，需老化或用甲醇冲洗。2.有杂质峰 在条件（流动相、固定相、温度和压力等）一定，样品浓度很低时（Cs、Cm 很小）时，K 只取决于组分的性质，而 与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件，在这种条件下，得到的色谱峰为正常峰；在许多情况下，随着浓度的增 大，K 减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K 也增大，这时色谱峰为前延峰。因此，只有尽可能 减少进样量，使组分在柱内浓度降低，K 恒定时，才能获得正常峰。 平衡分配系数 K 是指在固液两相体系达平衡状态时，溶质在两相中的浓度的比值。分配系数反映了溶质在两相中的迁 移能力及分离效能，是描述物质在两相中行为的重要物理化学特征参数。 峰前延原因 解决方法 1、柱温低：升高柱温 2、样品溶剂选择不恰当：使用流动相作为样品溶剂 3、样品过载：降低样品含量 4、筛板阻塞：a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱 5、色谱柱塌陷：填充色谱柱 避免拖尾：加入二丁胺等扫尾剂、调整流动相 pH 较强的酸类或碱类物质都会产生拖尾现象，一般的解决办法是调节流动相的 pH 值，对于酸性物质拖尾，一般是加入 乙酸调节流动相的 pH 值到酸性，一般在 2-3 左右，对于碱性物质拖尾，一般是加入三乙胺等碱性物质，调节 pH 至到 碱性 峰拖尾的可能的原因：1 流动相的选择有问题 2 柱超载 3 柱间的死体积太大 在吸附色谱中，前沿峰一般来说比较少见，它是由于色谱柱对被分离组分的吸附能力先弱后强造成的（比如溶质浓度 等因素） ，其吸附等温曲线为凹型；拖尾则比较常见，与前沿峰相反，其吸附能力是先强后弱，因此其吸附等温曲线为 凸。 柱温选择不正确调节柱温，拖尾首先考虑柱子的问题，换根柱子试试，其次就是流动相的 PH，选择合适的 PH 至关重 要，一般用磷酸盐缓冲液及磷酸调 PH2~3 会有改善吧。如果是碱性样品，可适当的加入三乙胺来竞争一下。 我试过同一张谱图中，有前伸峰，也有拖尾峰，后来发现是柱子选择的问题，样品中成分的极性不一样 拖尾和被测定组分、色谱柱、流动相有很大关系。 峰拖尾有可能是:1.阀连接处出现死区；2.进样器内有污染或不干净；3.色谱柱选择不当；4.进样技术差；5.样品在流动 相中溶解度小；6.进样量太大。 1. 原因：进样体积太大或样品浓度太高，样品过载致使平衡被破坏； 解决办法：减小进样量或稀释样品 2.对于流动相来讲样品溶剂太强； 解决办法：用流动相溶解样品 3.柱或保护柱被污染 解决办法：清洗柱或保护柱，必要时更换 4.柱性能下降 解决办法：检查柱效，对色谱柱进行再生处理，必要时更换 流动相的比例对样品分离影响很大，比例不适当就会产长拖尾，所以要调整流动相的比例； 再就是调整流速。 基本上没有完全对称的峰，大多数峰都拖尾，拖尾的原因很大程度是柱头污染和板结造成的，趋势是柱子拖尾越来越 严重，我曾经将拖尾十分严重的色谱柱打开，发现柱子入口端的填料颜色非常深，而且填料靠近管壁的一层已经结成 了一圈硬壳， 新柱子前沿的多一些， 理论上分配系数等于 1 的组分无论如何分离都是对称的， 分配系数不为 1 的情况峰型都不对称， 在塔板数非常高的时候，峰型近似于正态分布曲线。 拖尾有可能是柱效不高，使用的柱子不合理；当然也可能是配试液的溶剂有问题，再有就是流动相了。 色谱峰拖尾原因：产生的死体积太大，样品浓度太高，流速、柱效也不排除柱子污染。 可能柱子超载，稀释一下就好了；或是柱效不行了，需要换新柱子；也有可能是柱子的极性不合适，调调 pH 应该就 好。

从原理上说，拖尾和前沿都是不可避免的，因为绝对线性的吸附（分配）等温线是没有的，而且色谱柱这种多塔板的 结构也会导致色谱峰的展宽会越来越大，所以通常的峰都是后面比前面宽，也就是拖尾。只能说通过改善条件来优化。 柱子或保护柱被污染，柱子性能下降，保护柱失效都可能造成前沿和拖尾。 前沿的原因还可能是进样体积太大或样品浓度过高，造成样品过载，平衡被破坏。 简单的从色谱柱分离机理角度谈一下：造成拖尾的原因多数是因为要分离的化合物是碱性的。硅胶表面的硅羟基 pKa 值是 2-3，也就是当流动相的 pH 值大于这个值，硅羟基就会解离，这时这个氧带的外层电子对碱的吸附是特别强的， 很多人知道硅羟基对碱性物质吸附，就是这个原因。那么就应选择封尾的柱子，但是即使封尾，不管工艺怎么好，都 不会是 100%能封住。那么就争取从 pH 值角度考虑，减小流动相 pH，或者说加三乙胺，三乙胺容易被这个解离的硅 羟基吸附， 其实作用相当于对色谱柱封尾。 从流动相的角度考虑用甲醇做碱性物质要相对比乙腈好， 因为甲醇含有-OH， 多少能抑制硅羟基解离，加缓冲盐的目的也是抑制硅羟基解离。所以说种种方法都是抑制硅羟基解离或竞争吸附，尽 量减少解离的硅羟基对碱性物质的吸附。 前面第二个前沿峰图，非常有可能是色谱柱的硅胶溶解造成的。前沿峰还有可能是由溶解性效应引起，就是溶解样品 的溶液对样品的溶解性远大于流动相。 现在市场上有种色谱柱经过表面处理之后残留的硅羟基 pKa 值能达到 5.5-6 我不说哪家生产的，用这种柱子做你的流 动相 pH 控制在 5.5 以下拖尾的效果非常好，另外建议做碱性化合物时选择色谱柱尽量选择比表面积小，含碳量低些的 色谱柱，效果会好。 色谱柱的柱效、流动相的组成、流动相的 PH、柱温的控制、进样器等问题 原因很多：分析物本身的性质；色谱柱问题；流动相问题 分析物本身的性质。 柱子问题，柱子选择不当，分析的样品极性过强碱性物质。色谱柱老化，柱效降低，柱流失严重；流动相问题，PH 值 选择不当，有机相比例过低等。 怎样避免拖尾和前沿， 2.怎样避免拖尾和前沿，有何措施？ 怎样避免拖尾和前沿 有何措施？ 选择合适的色谱条件和色谱柱，就可以避免峰拖尾和前沿 在处理样品时选择合适的流动相最为重要，所以在实验设计时充分了解所要分离的物质的化学性质和溶解度、极性等 相关问题，摸条件时找到较好的流动相，是避免拖尾峰出现的最好方法。 避免拖尾和前沿主要要控制好溶质的量，每种色谱方法有一定的线性范围，超过这一范围不对称峰则会出现。 要看是由于什么原因造成的： 分析物本身的性质：这类问题首先要选择合适的色谱柱，另样品的前处理非常重要，部分样品在分析过程中分解，那 肯定是拖尾的。

色谱柱问题：主要由于色谱柱柱效下降等引起，维护色谱柱或者更换 流动相：流动相未起到抑制拖尾或者前沿的作用，应添加适当缓冲剂如三乙胺、醋酸等。 一般拖尾比较厉害的是生物碱类成分的检测， 3.一般拖尾比较厉害的是生物碱类成分的检测，你对此类物质防止拖尾有什么好的建议吗？ 一般拖尾比较厉害的是生物碱类成分的检测 你对此类物质防止拖尾有什么好的建议吗？ 对于生物碱类，应该选用封端了的色谱柱，减少硅羟基的作用，还有就是调节流动相的 PH 值来避免拖尾 对于生物碱类成分的分离关键在于加入的酸的量，因为你得让成分被色谱柱吸附后，能够很好的溶解在流动相中，即 解吸附下来才行啊，所以注意你的酸的加入量吧！还有就是选择合适的色谱柱，最重要喽！ 分离碱性物质，易产生拖尾，一般我们都是在流动相中加点三乙胺（即碱性物质）. 生物碱类液相色谱一般都会在流动相里加入少量碱（二乙胺或氨水等） ，使流动相的 PH 偏碱性。不过用普通的 C18 柱来分析可能进不了几针柱效就不行了，考虑使用宽 PH 范围的 C18 柱。 关于生物碱薄层问题，可以对于薄层板的话可以用 10%NaOH+CMC-Na 溶液进行铺板，还可以适当调节展开剂 PH 值 来防治生物碱拖尾。 应该加三乙胺吧，及三氟乙酸等调节 PH 值，使用氨基的色谱柱啊，不管怎么说首先考虑的是色谱柱的选择。 进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？ 4.用 HPLC 进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？ 用 关于漂移问题： ① 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 ② 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 ③ 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 关于快速变化问题 ① 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 ② 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 ③ 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 5.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？ 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？ 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么 ① 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 ② 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 ③ 可能柱超载，减少进样量。 6.HPLC 灵敏度不够的主要原因及解决办法 ① 样品量不足，解决办法为增加样品量 ② 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 ③ 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 ④ 检测器衰减太多。调整衰减即可。 ⑤ 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 ⑥ 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 ⑦ 检测池中有气泡。解决办法为排气。 ⑧ 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 ⑨ 流动相流量不合适。调整流速即可。 ⑩ 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。 7.做 HPLC 分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？ 分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？ 做 ① 泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理； ② 比例阀失效，更换比例阀即可； ③ 泵密封垫损坏，更换密封垫即可； ④ 溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法； ⑤ 系统检漏，找出漏点，密封即可； ⑥ 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。 8.我最近更换了另一种牌号的 ODS 柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？ 我最近更换了另一种牌号的 虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？ 这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。 尽管过去几年来， 填料的制造技术有了极大的提高， 但不同的厂商的 ODS 填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号 的 ODS 柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA） ，将会使硅醇基的成键能 力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。 如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。 9.我购买的 HPLC 柱验收测试时柱压过高，请问为什么？ 柱验收测试时柱压过高，请问为什么？ 我购买的 柱压过高是 HPLC 柱用户最常碰到的问题。

其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查 问题的起因。 ① 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； ② 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； ③ 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用 10 倍柱体积的流动相冲洗柱子， （此时不要连接检测器，以防固体颗粒 进入流动池） 。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。 ④ 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。 若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE 提供的 Rheodyne 7315 型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。 10.色谱双峰产生的可能及判断和处理 色谱双峰产生的可能及判断和处理 HPLC 分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度） ，峰 型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不 到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法， 向同仁指教。 色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。我将这种情况分为四种原因。 1 色谱柱 如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少） ，尤其采用单一纯物质时，可 以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大 峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头 的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大， 柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新 填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。 2 溶剂极性及进样量 许多 HPLC 分析者对此可能不以为然，一般的 HPLC 的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产 生的一个很重要的原因。目前 HPLC 分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。 样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强 度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为 20ul，此条件下完全 可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样） ，且拖尾，保留时间会提前(相对进样量少而 言)，将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达 到平衡造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的 双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题） 。将样品稀释再进样就可以了，这是由 于进样量过大，色谱柱过载造成的。 3 样品的特性 有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。 在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤 其 pH，双峰现象将消失，如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在 LC-MS 下，用质谱检测器，其 质谱的总离子流图上较明显，例如我分析过的农药啶虫眯（吡虫清） 。 4 参数 记录的参数一般都内定的，不必修改，但 gc 和 HPLC 的参数是不完全一致的，例如 C－R3A 数据记录 仪上的一般记录时间间隔 gc 为 2ms，HPLC 为 5ms，如果记录间隔时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。

总结的挺全面的

看的我头晕，最好排排版啦，开始三句就重复啦

原文由 yuduoling(yuduoling) 发表:
总结的挺全面的

转的别人的资料

原文由 木有才(xgy2005) 发表:
看的我头晕，最好排排版啦，开始三句就重复啦

确实排版有问题啊

这些是液相的资料吧？

原文由 yifan1117(yifan1117) 发表:
这些是液相的资料吧？

内容太多.