人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的纯化和性质
【英文篇名】 Purification and Characterization of the Glutathione S- Transferase From Human Placenta
【作者中文名】 李春海; 张凯; 谭子兴; 陈毓兰;
【作者英文名】 Li; Chun-hai Zhang; Kai Tan; Zi-xing Chen; Yi-lan (Institute of Basic Medical Sciences; Beijing 100850);
【作者单位】 军事医学科学院基础医学研究所; 西安医科大学代培研究生; 军事医学科学院放射医学研究所 北京;
【文献出处】 中国生物化学与分子生物学报, Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology, 编辑部邮箱 1991年 02期
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【关键词】 谷胱甘肽s-转移酶; 人胎盘; 亲和层析法;
【英文关键词】 Glutathione S- Transferase from Human Placenta (GST-π); Affinity Chromatography; Amino Acid Composition; HPLC;
【摘要】 将人胎盘组织粗匀浆经105000×g超速离心后,用S-已基谷胱甘肽-琼脂糖-6B亲和层析一步纯化法获得电泳纯的人胎盘GST(简称GST-π)。其比活性较粗匀浆高194.7倍,回收率为50%。再经DE_(52)交换柱进一步纯化,用KCl浓度梯度洗脱后为单一锐峰,等电聚集电泳呈一条带,等电点(pI)为4.60。GST-π经TSKgel-G3000SW柱高效
液相层析,也为单一对称锐峰,测得其分子量为45.2kD;在SDS-PAGE电泳也为单一区带,测得其亚基单位的分子量为22.5kD。GST-π氨基酸组成分析可检出十六种氨基酸,其中以谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸及甘氨酸含量较高。 GST-π酶动力学研究证明GST-π以GST和CDNB为底物时km值分别为0.16mmol/L和0.55mmol/L,经测定表明,GST-π的最适作用pH值为7.5,在pH6.5—9的范围内较为稳定,体外GST-π在温度超过25℃对容易失活。以GST-π为抗原,得到兔抗人GST-π抗血清,其效价为1:32,与人肝GSTs不发生免疫交叉反应。