主题：【第六届原创】三磷酸腺苷二钠注射液含量方法学研究

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发表于：2012/12/27 23:38:20 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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三磷酸腺苷二钠注射液含量方法学研究

三磷酸腺苷二钠的重量比 照高效液相色谱法（中国药典2010年版附录V D）测定。

1.色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基键合硅胶为填充剂；以0.2mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠35.8g，磷酸二氢钾13.6g，加水900ml溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加入四丁基溴化铵1.61g，加水至1000ml，摇匀）-甲醇（95:5）为流动相；柱温为35℃；检测波长为259nm；理论板数按三磷酸腺苷二钠峰计算应大于1500；各色谱峰的分离度应符合规定。出峰次序依次为一磷酸腺苷钠、二磷酸腺苷二钠与三磷酸腺苷二钠。

测定法 取精密量取A液适量，用流动相制成每1ml中含0.2mg的溶液；取20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算：

2. 测定三磷酸腺苷二钠的重量比溶液稳定性试验

将供试品溶液在室温放置8小时，记录液相色谱图峰面积，结果见表1。

验结果表明：本品溶液在8小时内测定稳定。

3. 测定三磷酸腺苷二钠的重量比溶液重复性试验

取供试品溶液连续进样6针，结果见表2。

试验结果表明：本品重复性良好。

4. 测定三磷酸腺苷二钠的重量比溶液精密度试验

精密量取040413批A液6份，用流动相制成每1ml中含0.2mg的溶液，分别测定重量比，结果见表3。

试验证明，本方法测定三磷酸腺苷二钠重量比的精密度良好。

5. 回收率试验

精密称取三磷酸腺苷二钠约0.4g、0.5g、0.6g各三份，分别置10ml量瓶中，分别加入处方量的辅料空白溶液，超声助溶后，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，量取续滤液1.0ml,加0.1mol/L磷酸盐缓冲液制成每1ml中含20μg的溶液，照分光光度法测定259nm波长处的吸收度，计算出总核苷酸。另取续滤液1.0ml,用流动相制成每1ml中含0.2mg的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算三磷酸腺苷二钠重量比。含量按下式计算。测定结果见表4。

三磷酸腺苷二钠含量（%）=总核苷酸×三磷酸腺苷二钠重量比

平均回收率为99.84%；RSD为0.17%

结论：由以上结果知，本品含量测定方法准确度较高。

6. 含量测定

取本品A液1.0ml，加0.1mol/L磷酸盐缓冲液制成每1ml中含20μg的溶液，照分光光度法测定259nm波长处的吸收度，计算出总核苷酸。另取本品A液1.0ml，用流动相稀释制成1ml中约含0.2mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算三磷酸腺苷二钠重量比。按下式计算三磷酸腺苷二钠含量，结果见表5。