主题：【原创】记一次液相色谱仪的检定

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suyirumo

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发表于：2013/02/26 11:05:11 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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楼主以前按照《液相色谱仪检定规程》（JJG705-2002）对自己实验室的液相仪器做过检定，当时就有很多的疑惑，年前在网上发现关于仪器检定出了一个新的国标，过年回来正好活不多，实验室有一台国产的液相比较闲（这里就不说品牌了(*^__^*) 嘻嘻……），就用它来练练手了

参考标准：《高效液相色谱仪》（GB/T 26792-2011）

检定项目：输液泵、检测器和整机性能

检定要求：

1.仪器工作条件（相信大家的仪器室都能满足这个要求把）

1.1环境温度：5℃~35℃；

1.2相对湿度：20%~80%；

1.3供电电源：电压220V±22V，频率50Hz±0.5Hz；

1.4室内应避免易燃、易爆和强腐蚀性气体及强烈的震动、电子干扰和空气对流等；

1.5接地良好

输液泵、检测器和整机性能的检定要求大家见附件国标要求吧，我就不一个一个的敲了。。。。

2.试验方法

这里只介绍我我在实验室能找到的东西，大家可根据国标要求和实验室情况因地制宜

2.1 输液泵

2.1.1密封性

这项楼主直接跳过了，因为平时实验的时候不会用到那么大的压力，再一个最重要的原因是怕出事故。。。。。。不敢这么整啊

2.1.2流量输出误差及稳定性

设备和试剂：

液相仪器（配工作站）；秒表一块；温度计一支；万分之一分析天平一台；报废色谱柱一支（提供背压用）；合适规格的称量瓶三个；超纯水若干。

试验程序：

将液相仪器和色谱柱完全连接好，以超纯水为流动相，1ml/min平衡半个小时左右（此时压力在8MPa左右为宜）。用温度计测量此时水的试验温度。设定合适量，待输液泵运行稳定后，按国标附表设定流量，在检测器排出口用称重过的称量瓶收集流动相，同时用秒表计时，待达到规定的收集时间后停止收集流动相，并停止秒表计时。每个流量各测试三次。按国标中的公式计算流量输出误差及稳定性。

这里我测得是0.1ml/min、1ml/min、2ml/min和5ml/min的流速，需要注意的是：

（1）一定要有背压，要不测得流速是不准的；

（2）水的密度不能按照1g/ml计算，我是用的0.998g/ml。

2.1.3梯度误差

设备和试剂：

液相仪器（配工作站）；报废色谱柱一支（提供背压用）；流动相A：超纯水；流动相B：0.1%丙酮的水溶液。

试验程序：

将色谱仪器和色谱柱连接好，将紫外检测器波长设定在254nm，按照国标附表设定梯度程序。将输液泵流速设定为1ml/min，带仪器稳定后，开始采集数据，得到梯度曲线，重复两次。测量各种配比时的输出信号值，用国标中的公式计算梯度误差，取2次结果最大者为输液泵梯度误差。

2.2检测器

2.2.1波长示值误差

设备和试剂：

液相仪器（配工作站）；两通一个；紫外波长标准溶液（配制方法参见附录A）；紫外波长标准溶液空白液：0.05mol/L硫酸溶液。

试验程序：

将色谱仪器和两通连接好，先以紫外标准溶液空白液为流动相，分别在（235-5）nm、（257-5）nm、（313-5）nm、（350-5）nm各波长下将检测器示数回零。之后换用紫外波长标准溶液做流动相。待示数稳定后，每1min改变1nm波长，这样将得到一组不同波长处的响应信号值，最高值对应色波长与标准溶液特征波长示值之差，即为检测器在该波长处的波长示值误差（如下图）。按此方法依次检验235nm、257nm、313nm、350nm处的波长示值误差，取其中最大值为检测器波长示值误差。

2.2.2波长重复性

设备和试剂

同2.2.1。

试验程序：

按照上面的方法重复3次，选取最大值和最小值之差为波长重复性误差。

2.2.3静态基线漂移及静态短期基线噪声

设备：

液相仪器（配工作站）。

试验程序：

将检测器波长设定为254nm，检测池为空池（充满空气）。开机预热后记录基线1小时，取1小时内平行包络线的中心线的起点与终点的差值为检测器基线漂移，选取所记录基线中噪声较大的5min作为计算噪声的基线，以1min为界面平行包络线，按国标公式计算短期基线噪声。5个平行包络线宽度的平均值，作为检测器短期基线噪声。

2.2.4动态基线漂移及动态短期基线噪声

设备和试剂

液相仪器（配工作站）；报废色谱柱一支（提供背压用）；流动相？100%甲醇。

试验程序：

将液相仪器与色谱柱连接好。以100%甲醇为流动相，流量设定为1.0ml/min。其他同2.2.3。

2.2.5最小检测浓度

设备和试剂：

液相仪器（配工作站）；进样针；C18色谱柱一支：5um、4.6*250mm，理论塔板书不小于50000N/m；试样：1.0*10-7g/ml 萘/甲醇溶液；流动相：100%甲醇。

试验程序：

将液相仪器与色谱柱连接好，检测器波长设定为254nm，流量设定为1.0ml/min，待检测器示值稳定后从注入1.0*10-7g/ml的萘/甲醇溶液，采集色谱图，记录色谱图中萘的峰高和短期基线噪声。按国标公式计算最小检测浓度。

2.2.6线性范围

设备和试剂：

液相仪器（配工作站）；进样针；试样：甲溶液：2%异丙醇水溶液，乙溶液：1%丙酮的2%异丙醇溶液。

试验程序：

将检测器和泵连接好，波长设定为254nm，流量设定为2ml/min。开机预热后，以甲溶液为流动相A，乙溶液为流动相B。先以甲溶液为流动相，待基线走平后，设置梯度程序。以前五个丙酮含量（0.1%~0.5%五个点）和对应相应信号值做标准曲线，在曲线上找出丙酮含量大于0.5%的各点计算值，与对应含量的响应信号值比较，响应信号值刚好大于计算值5%时，认为曲线弯曲，此点浓度为线性上限CH，按2.2.5最小检测浓度试验方法测出丙酮CL值，由CH/CL算出检测器线性范围。

图谱走出来的效果和国标基本一致，而且方法要比国标简单

，不过写出来就很长了，这里就不做描述了。

2.3整机性能

2.3.1定性、定量测量重复性

设备和试剂：

液相仪器（配工作站）；进样针；C18色谱柱一支：5um、4.6*250mm，理论塔板书不小于50000N/m；试样：1.0*10-4g/ml 萘/甲醇溶液；流动相：100%甲醇。

试验方法：

将液相仪器和色谱柱连接好，以100%甲醇为流动相，流量设定为1.0ml/min，检测波长为254nm，基线稳定后注入1.0*10-4g/ml 萘/甲醇溶液20ul，记录保留时间和峰面积，连续7次。将记录的保留时间和峰面积数据带入国标中的公式计算定性重复性RSD值和定量重复性误差RSD值。