刚接触荧光光谱仪，云里雾里，求指教！！！！

看了一些资料，上面说关于最优激发波长的选择方法是：先设定激发波长200nm，进行发射模式扫描，范围在210-800nm。改变激发波长，再次进行发射模式扫描，观察峰位，峰位不变的则是荧光峰。然后以这个不变的荧光峰作为发射波长固定下来，进行激发波长的扫描，激发波长的范围要小于发射波长。此时将扫出来的峰型较好的峰，再次作为激发波长固定，进行真正的发射波长扫描，得到较好结果。

1.我想知道在这个过程中，是不是当固定激发波长进行发射模式扫描时，激发波长要小于扫描范围。类似的，激发模式扫描时，固定的发射波长要大于扫描范围？

2.上面说的那个方法应该不是采用预扫描方法的吧？那么可以采用的预扫描方法吗？预扫描的方法只需要分别设置激发光和发射光的起止波长就可以了吧？扫出来后又该如何根据得到图谱判断荧光峰和激发波长呢？

3.当已知一种物质的最佳激发波长来直接扫描其在不同浓度下某一范围内的荧光峰时，是不是只需要进行单个单色器的扫描----发射模式的扫描就可以了？但是我在有些文献里看到对某个物质进行荧光扫描的参数设置是with the following setting: 350 nm as excitation wavelength and 480nm as emission wavelength.这是什么情况呢？这里设定的发射波长是用来做什么的呢？这个发射波长不是观察出来的吗？即可以看到350nm激发得到其荧光峰在480nm处。

4.只要是进行单个单色器的扫描，固定的激发波长就一定要小于扫描范围，固定的发射波长就一定要大于扫描范围吗？为什么？

推荐答案：sunny04141125回复于2013/07/03

1.我想知道在这个过程中，是不是当固定激发波长进行发射模式扫描时，激发波长要小于扫描范围。类似的，激发模式扫描时，固定的发射波长要大于扫描范围？

答：当固定激发扫描发射谱图的时候，激发波长可以包含在扫描范围内，当然发射谱图中会出现非常明显的瑞利峰（这是由于激发光的散射产生的），发射端同理。

2.上面说的那个方法应该不是采用预扫描方法的吧？那么可以采用的预扫描方法吗？预扫描的方法只需要分别设置激发光和发射光的起止波长就可以了吧？扫出来后又该如何根据得到图谱判断荧光峰和激发波长呢？

答：您说的方法不用进行过预扫描。预扫描对实际测试的谱图貌似没有太大的影响吧，我用过日立的分子荧光，点击预扫描仪器只是根据样品内部调整了一下，应该是找到一个让谱图效果比较好的条件吧。没有在软件中看到预扫描的谱图。您用的PE的产品我不太了解呵呵。

3.当已知一种物质的最佳激发波长来直接扫描其在不同浓度下某一范围内的荧光峰时，是不是只需要进行单个单色器的扫描----发射模式的扫描就可以了？但是我在有些文献里看到对某个物质进行荧光扫描的参数设置是with the following setting: 350 nm as excitation wavelength and 480nm as emission wavelength.这是什么情况呢？这里设定的发射波长是用来做什么的呢？这个发射波长不是观察出来的吗？即可以看到350nm激发得到其荧光峰在480nm处。

答：理论上您理解的通过固定激发扫同一样品不同浓度的发射谱图，观察发射峰能量是没问题的。

我理解文献中的作者是已知这个样品的最佳激发和最佳发射波长，应用光度值法（建立标准曲线法），建立浓度和样品在其最佳发射峰位置能量相关的标准曲线，可以定量。

4.只要是进行单个单色器的扫描，固定的激发波长就一定要小于扫描范围，固定的发射波长就一定要大于扫描范围吗？为什么？

答：不一定小于或是大于扫描范围，但在得到的谱图中除了有您想关注的样品激发峰或荧光峰，还会出现一些诸如瑞利峰、拉曼峰、二级谱等杂散光带来的峰，只要不会对您的样品分析造成干扰就行。如果想滤除的话可以在样品仓里面加入适当的截止滤光片，就会把这些多余的峰滤除了。

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主题：【求助】急问LS55型荧光光谱仪的激发光谱和发射光谱究竟怎么设参数？