刚翻出来的帖子，跟大伙儿共享下。遗憾的是原网站就没有图啊，但文字也挺有力度的，有点儿长，耐心看哦。。
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Cleanert TPT 用于检测茶叶中的农药多残留方法正在申请AOAC国际协同认证。![]()
=============================================================================以下内容为转载：茶叶中668种农药和化学污染物多组分多类别残留-MS,gc-MS/MS和LC-MS/MS高通量分析方法
—国际AOAC协同研究实施方案（初稿）
AOAC Study Director庞国芳
中国检验检疫科学研究院北京朝阳区高碑店南路3号 100123
Email:qhdciqgfpang@yahoo.com.cn Fax:+86-335-5997608
1. 国际AOAC协同研究的目的世界经济一体化步伐加快，世界各国食品安全战略地位的确立以及国际贸易对农药残留限量门槛高筑，都呼唤高通量残留分析技术。目前，仅对茶叶，世界17个国家和国际组织已经制订了800余项农药残留限量标准（MRL）。这项协同研究的目的在于评价gc-MS（gc-MS/MS）和LC-MS/MS测定茶叶中668种农药多组分残留方法的灵敏度、重现性和再现性是否能够满足制定为AOAC Official方法。2. 方法应用范围本方法适用于绿茶、红茶、普洱茶和乌龙茶中668种农药和化学污染物残留的gc-MS（gc-MS/MS）和LC-MS/MS定量测定。gc-MS测定的490种农药和化学污染物的方法检出限(LOD)范围为1.0-500 μg/kg，LC-MS/MS测定的448种农药和化学污染物的方法检出限(LOD)范围为0.03-4820 μg/kg。对于LOD≤100µg/kg的农药品种，gc-MS法有482种，占所测农药的98％，LC-MS/MS法有417种，占所测农药的93％；对于LOD≤10µg/kg的农药品种，gc-MS法有264种，占所测农药的54％，LC-MS/MS法有325种，占所测农药的73％。对于gc-MS和LC-MS/MS均可测定的270种农药，LOD≤100µg/kg的农药品种，gc-MS法有264种，占所测农药的98％，LC-MS/MS法有247种，占所测农药的91％；而对于LOD≤10µg/kg的农药品种，gc-MS法有133种，占所测农药的49％，LC-MS/MS法有200种，占所测农药的74％。3. gc-MS(gc-MS/MS)&LC-MS/MS分析程序![]()
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| ⑤Concentration Concentration |
图1. 分析步骤流程| Add IS Heptachlor epoxide for gc/MS-SIM, gc/MS/MS or Chlorpyrifos-methyl for LC-MS/MS.Evaporate to dryness with nitrogen at 35℃ |
| Cleanert TPT Cartridge(2g,12mL) or Envi-Carb/PSA(0.5g/0.5g,6mL) for clean up. Elute with 25 mL acetonitrile+toluene(3+1), concentrate about 0.5 mL |
Make up to 1.5 mL with hexane |
Make up to 1.5 mL with acetonitrile+water (3+2) |
gc/MS Determination (490 Varieties) GB/T 23204-2008 |
LC-MS/MS Determination (448 Varieties) GB/T 23205-2008 |
| Homogenize at 13500r/min for 1min, and centrifuged at 4200r/min for 5 min before the supernatants are taken, while the dregs are re-extracted and the extracts are combined and then concentrate about 1 mL |
图2. gc-MS（gc-MS/MS)和LC-MS/MS分析程序
Study Director郑重提醒：国际AOAC协同研究是各国相关实验室参加的统一标准化行动，实验的每一步骤包括任何一种试剂材料的改变，都要在预协同研究阶段，经过实习考核验证合格后，才能在正式协同研究中采用，并在附录B Excel worksheet 表1的相应栏目中注明，这是志愿参加者必须遵守的规则。4. “缩身的”国际AOAC协同研究方案如果组织数百种农药的国际AOAC协同研究，会给参加者带来资源、时间和人员不可想象的困难。因此，国际AOAC提出了一个“缩身”的国际协同研究方案，即选择两种茶叶，gc-MS（gc-MS/MS）和 LC-MS/MS 两种方法，各检测30种农药，共计60种农药参加协同研究。我们从668种农药中选出的60种农药见表1，这60种农药代表的是gc-MS（gc-MS/MS）和LC-MS/MS检测的668种农药，他们分属于有机氮、有机卤素、有机磷、拟除虫菊酯类等农药；按功能分类包括：杀虫剂、除草剂、杀菌剂、杀螨剂等农药，见表2和表3。这些药物是茶叶生长过程中普遍使用的农药，也是茶叶国际贸易中经常被要求检测的农药，另外，这些农药被喷施到茶叶中后，都具有较好的稳定性，其极性也有广泛的代表性。其中有少数农药是gc-MS（gc-MS/MS）和LC-MS/MS都检测的。表1. 60种代表性农药
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5. 协同研究样品数量和目标农药的残留浓度水平每个参加的实验室共检测16个Collaborative Study 样品。每个样品仅够一次实验，也就是说参加的实验室对每个样品仅有一次实验机会，必须做到万无一失才能成功！因此，Study Director重复强调务必仔细认真地对待这项协同研究。这16个正式协同研究样品的组配见图3。
Fortified solution No. 02 |
Fortified solution No. 03 |
Fortified solution No. 04 |
Fortified solution No. 05 |
Fortified solution No. 06 |
Fortified solution No. 07 |
Fortified solution No. 08 |
Fortified solution No. 09 |
Fortified Solution No. 10 |
图3. Number of Blank, Fortified and Pesticide Aged Samples for the Collaborative study
这里的样品编号，只代表协同研究方案的设计思路，不代表以后寄给参加者的实际样品代号。30种目标农药浓度范围10ug/kg-2.0mg/kg(1MRL-5MRL). 添加样品和陈化样品都是按Youden Pair原则设计的，一对两个样品，目标农药浓度相差约为5％。6. 国际AOAC协同研究流程![]()
图4. 国际AOAC协同研究流程图
7. Study Director给参加实验室寄送的实验材料Study Director将提供二种实验材料包裹，分别用于gc-MS（gc-MS/MS）分析方法协同研究和LC-MS/MS分析方法协同研究。协同研究实验室报名参加哪个分析方法协同研究，就会收到相应的实验材料包裹，协同研究实验材料接收表见附录表1-1和表1-2。每个实验材料包裹将包含以下材料：7.1 质量控制标准储备溶液2支安瓿瓶（1.0mL ×2支，含备用1支）。用于检查仪器的灵敏度和稳定性。7.2 For Pre-collaborative study 材料(1) 30种农药混合标准储备溶液：2支安瓿瓶（1.0 mL× 2支，含备用1支）。(2) 内标储备溶液：2支安瓿瓶（1.0 mL× 2支，含备用1支）。(3) 绿茶和乌龙茶空白样品：各1瓶（200g × 2）。(4) 考核样品：①添加溶液：3支安瓿瓶（0.5 mL× 3）,供制备考核样品；②绿茶空白样品：3袋(5.0g × 3 ) ,供制备考核样品；③乌龙茶陈化样品：3袋（5.0g × 3）。7.3 For Collaborative study 材料(1)30种农药混合标准储备溶液：2支安瓿瓶（1.0 mL×2支，含备用1支），供建立至少5点基质匹配内标校准曲线。(2)内标储备溶液：2支安瓿瓶（1.0 mL×2支，含备用1支）。(3)添加溶液：10支安瓿瓶（0.5 mL×10支），供制备添加样品。(4)茶叶空白样品：10袋（5.0g × 10），No.01-No.05为绿茶， No.06-No.10为乌龙茶，用于制备添加样品。(5)茶叶陈化样品：6袋（5.0g × 6），No.11-No.13为绿茶， No.14-No.16为乌龙茶。(6)绿茶和乌龙茶空白样品：各1瓶（200g × 2），供制备基质匹配空白样品溶液。对于不能买到新研制Cleanert-TPT 柱的实验室，Study Director 可提供所需Cleanert-TPT 柱。8. AOAC Pre-collaborative study8.1 预协同研究的重要意义由于茶叶基质复杂，这项研究内容多，技术含量高，有一定难度，预研究的目的AOAC Sr. Director, Stakeholder Communications Krystyna McIver博士做了精辟解释：“pre-collaborative study by the participating laboratories to ensure the laboratories are qualified to run the method”。Study Director再次提醒：16个协同研究样品，每个样品，每个参加者只有一次实验机会，成败一锤定音。但Study Director提供给每位参加者的实习样品，却足够你通过充分实习，达到熟练掌握这项技术关键控制点的目的，希望你十分珍惜这次预协同研究提供的实习机会。8.2 预协同研究验收标准(1) gc-MS（gc-MS/MS）或LC-MS/MS至少5点基质匹配内标校准曲线，线性相关系数R2≥0.995。(2) 回收率在70-120％范围内，RSD＜15％（n=5)。(3) 目标农药离子丰度比要符合AOAC标准或EU标准[2]，见表4。表4. Recommended maximum permitted tolerances for relative ion intensities using a range of spectrometric techniques
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Study Director特别提醒：协同研究能否成功，关键取决于参加实验室预协同研究考核结果是否能达到上述验收标准。对考核样品，无论是回收率、RSD、离子丰度还是R2值，任一指标不达标的数量，超过总数的30％，原则上就不能再继续做正式协同研究样品。8.3预协同研究实习内容8.3.1 制备三种标准工作溶液（农药混合标准工作溶液，内标工作溶液和质量控制标准工作溶液）预协同研究使用的农药混合标准储备溶液、内标储备溶液和质量控制标准储备溶液均由Study Director 提供，体积均为1.0 mL，需要稀释成标准工作溶液后再使用。具体步骤如下：将任一种含储备溶液的安瓿瓶直立放置，待安瓿瓶内顶部的溶液沿内壁完全流下时，再小心打开安瓿瓶，把其中的溶液小心转移至10ml容量瓶中。为保证全部转移，用3×1mL甲苯清洗安瓿瓶，将洗液一并转移至10ml容量瓶中，用甲苯定容至刻度，混匀后即成为相应标准工作溶液。标准工作溶液的浓度见协同研究方法中第5.11节和表1、表2。标准工作溶液应避光保存于4℃冰箱中备用。8.3.2 建立gc-MS（gc-MS/MS）分析程序①按照协同研究方法6.3.1节色谱条件，选择色谱柱并设定仪器色谱参数，建立gc分析方法。②按照协同研究方法6.3.1节和6.3.2节的质谱条件以及表3-6中的定性、定量离子等质谱参数，建立gc-MS（gc-MS/MS）质谱采集方法。注意驻留时间的设定，一般不小于10ms。③对于gc-MS需建立定量方法。吸取8.3.1节制备的农药混合标准工作溶液50µL和内标工作溶液40µL，于2mL进样瓶中，用氮气吹干，并用1mL正己烷定容。按照采集方法检测，再根据每种农药的保留时间和监测离子建立定量方法。8.3.3 建立LC-MS/MS分析程序①按照协同研究方法6.3.3的色谱条件，选择色谱柱并设定流动相洗脱梯度程序（见协同研究方法表7）等色谱参数。②按照协同研究方法6.3.3节的质谱参数，如每种农药的定性/定量离子对、碰撞能量、离子喷雾电压和雾化气压力等参数（见协同研究方法表8-9），设定质谱测定方法。Study Director提醒：本方法介绍的分析参数均以Agilent公司仪器为例。Waters、ThermoFisher和Applied Biosystems三公司仪器的分析参数初选结果列于附录A，仅供协同研究者选择参考。协同研究者使用这些仪器分析参数和30种目标农药的监测离子对时，务必在AOAC预协同研究阶段，经过茶叶添加实验验证和实习考核，并且实习考核结果达到验收标准后，方可在正式协同研究中采用，同时要求将所使用仪器分析参数填写到协同研究方法附录B Excel worksheet 表1中。8.3.4 用质量控制标准工作溶液检查仪器灵敏度和稳定性在每批样品测定前，连续注入1.0µL(gc-MS 或gc-MS/MS) 或者10.0µL（LC-MS/MS）质量控制标准工作溶液（见8.3.1），若连续2次进样农药峰保留时间之差不超过任何一次的3%，响应值之差不大于任何一次的6%，且内标物信噪比（S/N）gc-MS ＞1000，gc-MS/MS ＞2000，LC-MS/MS＞500。则可认为仪器灵敏度和稳定性符合要求，可以进行样品测试。否则对于gc-MS 或gc-MS/MS需要采取更换进样口内衬管、隔垫、色谱柱以及清洗离子源等手段进行维护；对于LC-MS/MS需要采取更换色谱柱，清洗离子源等手段维护。8.3.5 建立5点基质匹配内标校准曲线这次协同研究采用基质匹配内标校准曲线定量，gc-MS和gc-MS/MS 采用环氧七氯作为内标，LC-MS/MS 采用甲基毒死蜱作为内标.。5点基质匹配内标校准曲线建立程序如下：按照协同研究方法6.1、6.2.1和6.2.2的操作步骤，制备绿茶和乌龙茶空白样品溶液各5份，分别加入20,50,100,200和300 uL农药混合标准工作溶液（见8.3.1），对于gc-MS 和 gc-MS/MS加入40μL 环氧七氯内标工作溶液（见8.3.1）；对于LC-MS/MS加入40μL甲基毒死蜱内标工作溶液（见8.3.1）。在35℃水浴中用氮气吹干，对于gc-MS和gc-MS/MS用1.5 mL正己烷溶解残渣，对于LC-MS/MS用1.5 mL 乙腈-水 (3:2,V/V)溶解残渣，超声混合均匀，经0.2um滤膜过滤后即成为5点基质匹配内标校准混合溶液，用于建立5点基质匹配内标校准曲线。基质匹配内标校准混合溶液应现用现配。8.3.6 协同研究参加者自己实习Study Director 再三强调，协同研究的正式样品，仅够一次分析，而这里提供给你自己实习的样品，却足够你通过实习掌握方法的要点，希望你充分利用这个机会，熟练掌握这个方法，以便保障正式协同研究样品，一次实验就能成功！在此，Study Director 还要特别提醒，只有你的实习达到预协同研究验收标准时，方可检测考核样品。用Study Director提供的茶叶空白样品和制备的农药混合标准工作溶液（见8.3.1），自己练习1MRL（5g茶叶添加农药混合标准工作溶液25µL）、5MRL（5g茶叶添加农药混合标准工作溶液125µL）水平的添加回收率实验。当自己实习达到预协同研究的验收指标时，则可测定考核样品。8.4 预协同研究的考核内容8.4.1绿茶添加样品制备与测定：把Study Director寄去的三袋绿茶空白样品No.1，No.2和No.3加到相应编号的三个80 mL离心管中。将No.1，No.2和No.3三支添加溶液安瓿瓶，矗立放在相同编号的离心管之前，待安瓿瓶顶部溶液沿内壁流下后，打开安瓿瓶，将添加溶液全部加到相同编号的三个离心管中，用0.5 mL甲苯分3次清洗安瓿瓶（不要用过多的甲苯清洗安瓿瓶，否则样品提取时会共萃取大量的色素，影响净化和检测），并将洗液加到相应离心管中。放置20min，待试液被样品吸收，按AOAC协同研究方法6.1 Extraction和6.2 Clean-up进行样品制备。同时，制备5点绿茶基质匹配内标校准混合溶液，并建立基质匹配内标校准曲线用于对绿茶添加样品的定量。8.4.2乌龙茶陈化样品制备与测定：乌龙茶陈化样品No.4-No.6，按协同研究方法中6.1提取和6.2净化进行样品制备。同时，制备5点乌龙茶基质匹配内标校准混合溶液，建立基质匹配内标校准曲线用于对乌龙茶陈化样品的定量。8.4.3对分析结果进行以下三方面的审核：①保留时间是否在时间窗口之内；②积分线选择是否正确；③质谱解析要核对离子丰度是否符合EU标准或AOAC标准的要求。8.4.4参加者向Study Director提交预协同研究考核样品分析结果。参加协同研究的实验室将分析参数填在协同研究方法附录B Excel worksheet表1；参加gc-MS 或 gc-MS/MS的实验室，把实习考核样品的分析结果填在协同研究方法附录B Excel worksheet表2；参加LC-MS/MS的实验室把分析结果填在协同研究方法附录B Excel worksheet表3。并把Excel worksheet表1-3、质谱图和原始数据等尽快传送给Study Director。8.5 Study Director 向参加者反馈预研究结果Study Director收到上述考核实验结果表、质谱图和原始数据后，将在48小时内答复考核结果，供协同研究实验室考虑决定是否继续做Collaborative samples。9. 国际AOAC正式协同研究9.1 制备三种标准工作溶液（农药混合标准工作溶液，内标工作溶液和质量控制标准工作溶液）协同研究使用的农药混合标准储备溶液、内标储备溶液和质量控制标准储备溶液均由Study Director 提供，体积均为1.0ml，需要稀释成标准工作溶液后再使用。具体步骤与实习阶段相同。标准工作溶液的浓度见协同研究方法第5.11节和表1、表2。标准工作溶液应避光保存于4℃冰箱中备用。9.2 建立至少5点基质匹配内标校准曲线5点基质匹配内标校准曲线建立程序与实习阶段相同。每种农药基质匹配内标校准曲线的线性相关系数R2均应大于0.995。实际测定中，绿茶样品必须用绿茶基质匹配内标校准曲线定量，乌龙茶样品必须用乌龙茶基质匹配内标校准曲线定量，切勿混淆。基质匹配内标校准混合溶液应现用现配。9.3 协同研究添加样品制备与测定（以绿茶5个添加样品为例说明）将 Study Director提供的5份绿茶空白样品No.01, No.02, No.03, No.04, No.05分别加到相同编号的80mL离心试管里，见表5。将相同编号的添加溶液安瓿瓶依次矗立在对应离心试管之前，待溶液沿内壁流下后，打开安瓿瓶，将添加溶液加到对应编号的5个离心试管中，用0.5mL甲苯分3次洗涤每个安瓿瓶（不要用过多的甲苯清洗安瓿瓶，否则样品提取时会共萃取大量的色素，影响净化和检测），并将洗液加到对应离心管中。放置20min，试液被样品吸收后，即为协同研究添加样品，按协同研究方法6.1 Extraction and 6.2 Cleanup进行样品制备。表5.离心试管、空白样品和添加溶液安瓿瓶对应的编号
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Study Director特别提醒：①一份添加溶液对应一份空白样品，仅供一次分析，每支安瓿瓶里的添加溶液浓度，对参加者来说都是未知的，实验要特别仔细，一定要转移完全。②为了防止样品的交叉污染（特别是高浓度对低浓度或对空白样品的污染），样品制备和测定都要按编号顺序依次进行，所用制样器材要用完一次彻底清洗一次，以免污染下次的样品制备。9.4 协同研究陈化样品制备与测定（以绿茶3个陈化样品为例说明）绿茶陈化样品No.11-No.13，按协同研究方法中6.1提取和6.2净化进行样品制备。同时，制备5点绿茶基质匹配内标校准混合溶液，建立基质匹配内标校准曲线用于对绿茶陈化样品的定量，(见8.3.5)。9.5 gc-MS（gc-MS/MS）或 LC-MS/MS测定要求我们在过去的室内研究中发现，对绿茶和乌龙茶，gc-MS有12.5%-28.4%，gc-MS/MS有4.0％-9.7％的农药自动积分结果错误，需要手动积分修正。积分错误发生的频次与仪器受到污染的程度密切相关。因此，为了保证定性和定量结果的准确无误，要特别注意以下关键控制点：(1)在协同研究样品测定前，用质量控制标准工作溶液（见9.1），检查仪器的灵敏度和稳定性是否达到要求。(2)一批样品检测完毕后，再用质量控制标准工作溶液（见9.1）检查仪器灵敏度和稳定性，看前后是否一致。(3)严格按照方法的定性定量要求，核对每个农药峰的保留时间和离子丰度，确保每个目标农药峰都在积分窗口内并且识别正确；(4)核查每个农药峰积分线的选取是否正确，对于积分线存在问题的农药，统一采取峰谷到峰谷手动积分方式。9.6 参加实验室向Study Director提交正式协同研究结果参加者将实验结果按要求核准之后，把仪器分析参数填入协同研究方法附录B Excel worksheet 表1；将协同研究样品定量用基质匹配内标校准曲线的R2、Slope、Intercept值和目标农药含量填入协同研究方法附录B Excel worksheet 表4和表5中。完成上述工作后，请协同研究者把填好的Excel worksheet表1、表4和表5与相关的色谱图和原始记录的数据一起按时寄给Study Director。相关的色谱图包括：① 空白实验总离子流图（TIC图）② 绿茶和乌龙茶协同研究样品定量用基质匹配内标校准曲线图各一套（含30种农药）。③ 绿茶和乌龙茶添加样品带有离子丰度的质谱图各一套（含30种农药和1种内标）。在提交的这些色谱图适当地方用英文加以标记，以便AOAC方法委员会审核这些分析结果。Study Director提醒：要特别注意，一定要严格按方法的操作步骤一步一步去做，如有任何偏离，请在协同研究方法附录B Excel worksheet 表1- 5适当栏内说明。同时，请你对本方法的意见也填入上述表格方法意见栏内。10. 协同研究实验结果统计分析与判断标准(1) 基质匹配内标校准曲线R2＞0.995。(2) 实验数据异常值将通过Dixon testing判定并剔除，根据Statistical Manual of AOAC介绍的方法，对youden pair样品测定结果进行统计。这次协同研究茶叶中目标农药的识别采用欧盟标准[2]，见表4。方法回收率、重复性（RSDr）以及重现性（RSDR）的判断标准依据AOAC标准[3]，见表6。表6. Recoveries, RSDr and RSDR 的判断标准
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Study Director把各参加实验室的分析结果，汇总于表7（示例）中。表7.协同研究结果统计(示例表)
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11. 仪器系统适用性要求在每批样品测定前，用质量控制标准工作溶液（见9.1）对仪器进行灵敏度和稳定性检查。连续注入1.0µL(gc-MS或gc-MS/MS) 或者10.0µL（LC-MS/MS）质量控制标准工作溶液，若连续2次进样，目标农药峰保留时间之差不超过任何一次的3%，响应值之差不大于任何一次的6%，且内标物信噪比（S/N）gc-MS ＞1000，gc-MS/MS ＞2000，LC-MS/MS＞500。则可认为仪器灵敏度和稳定性符合要求，可以进行样品测试。否则对于gc-MS 或gc-MS/MS需要采取更换进样口内衬管、隔垫、色谱柱以及清洗离子源等手段进行维护；对于LC-MS/MS需要采取更换色谱柱，清洗离子源等手段维护。Study Director提醒：每次样品分析测试前和测试结束，务必要检查仪器的稳定性是否一致，以防因仪器的污染等原因，使灵敏度下降，稳定性波动，而导致较大的实验误差。不论gc-MS,gc-MS/MS，还是LC-MS/MS，都要配备分析数据处理软件。12. SPE 固相萃取装置质量条件根据今年124次AOAC年会有关茶叶多残留专题会上专家建议，在原推荐Cleanert-TPT和Envi-Carb+PSA 两种Cartriage基础上，将UCT、SUPELCO、Agilent、Waters、Varian、CNW、Bestown七家公司，具有与Envi-Carb+PSA（500mg/500mg，6mL）同类组成的Cartridge，又与Cleanert-TPT Cartridge进行了茶叶中多残留净化效率的对比研究，实验结果见表8和图5。表8 . 8种SPE柱对绿茶、乌龙茶中340种（LC-MS/MS）和227种（gc-MS，gc-MS/MS）农药在2MRL添加浓度净化效率的评价（n=16）![]()
备注：①除Cleanert-TPT柱填料量为2000mg，柱管体积12mL外，其余SPE柱的填料量均为500mg/500mg，柱管体积为6mL。②除UCT柱为1.0 Kpa负压下洗脱外，其余SPE柱均是自然重力洗脱。③回收率和RSD所占百分比数均为gc-MS,gc-MS/MS和LC-MS/MS三台仪器测定的平均值。④除色素效果：Ⅰ级是对两种茶叶去除色素效果均好; Ⅱ级为乌龙茶去除色素效果较好，而对绿茶效果稍差；Ⅲ级是对绿茶和乌龙茶去除色素效果均较差；Ⅳ级是对两种茶叶中去除色素效果均差。
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图5. 八种SPE柱对绿茶（a）和乌龙茶（b）去除色素净化效果的对比
（从左至右依次为UCT，SUPELCO，Agilent，Waters，Agela，Varian，CNW，Bestown）
从上述结果可以看出：从去除茶叶色素的效果看，Agela 公司Cleanrt-TPT除色素效果最好，属Ⅰ级；UCT 公司gcB/ PSA，Supelco公司ENVI-CARB-II /PSA，Agilent公司Carbon/PSA，Varian公司Carbon/PSA属Ⅱ级；Waters公司Carbon/PSA，CNW公司gcB/PSA属Ⅲ级；Bestown公司PSA/Carb 属Ⅳ级。就平均回收率在70-120％和RSD＜15％的农药数量所占百分比而论，绝大多数农药均符合AOAC方法的验收标准。因此，得出结论：第一，我们根据前期912次实验183312个数据推荐的Cleanert-TPT和Envi-Carb+PSA分别作为这项AOAC研究净化柱的第一和第二选择又经历了一次考证，实验结果再次证明这两种Cartridge的效能是Ruggedness；第二，这次8种SPE柱对茶叶净化效果的进一步对比实验发现，其余6种SPE Carbon/PSA（500mg/500mg,6mL）柱就回收率和RSD（n=16）而论，也达到了AOAC方法的验收标准，并且UCT 公司gcB/ PSA，Agilent公司Carbon/PSA，Varian公司Carbon/PSA对茶叶中色素去除效果也不错。如果这次协同研究参加者在国际AOAC预研究中，使用这些新柱子，也能达到AOAC预研究的验收标准，在正式协同研究中也可使用这些新推荐的Cartridge.不论选择上述推荐的哪种Cartridges，都要配置Visiprep 5-port flask vacuum manifold (RS-SUPELCO 57101-U, Sigma Aldrich Trading Co., Ltd),或者可替代的Solid phase Extraction Equipment。图6是我们实验室使用的Solid phase Extraction Equipment，供协同研究实验室参考选用。![]()
这里推荐的Supelco的Visiprep 5-Port flask vacuum manifold是因为它对接收大体积(32mL)淋洗液比较方便，如果参加实验室能在Cartridge净化过程中能解决大体积(32 mL)接收，也可用其它SPE装置。13. 检查来自试剂的干扰和影响为了防止来自试剂的干扰，要对所用试剂进行方法全过程的空白实验，确认无干扰峰存在，并请每个实验室向Study Director提供溶剂空白色谱图。14. 避免样品之间交互干扰为了防止样品之间的交互干扰，前一个样品提取完毕，下一个样品提取之前，均质器的刀头要用2×50 mL乙腈，以提取样品同样的方式，均质30秒进行彻底清洗，以避免农药含量高的样品，对低含量或不含农药样品的干扰，这一点在这次国际协同研究中是特别重要的。15. 样品测试顺序要求对于协同研究样品的测试，Study Derector建议按以下顺序连贯进行：样品测定之前，用质量控制标准工作溶液（见9.1）进行2-3次重复进样（检查仪器灵敏度和稳定性）、基质匹配内标标准溶液浓度由低到高1、2、3、4、5点连续进样（建立基质匹配内标校准曲线（见9.2））、样品试液测定NO.01、NO.02、……（按照编号顺序由小到大），最后再重复检测质量控制标准工作溶液2-3次（再检查仪器灵敏度和稳定性）。16. 对协同研究参加者技术水平的要求这次国际协同研究的16个样品中的每一个，都作为盲样仅作一次分析。为了得到理想的分析结果，每个参加者在分析这16个协同研究样品之前，必须参加预协同研究，当实习的水平达到技术要求之后，可做实习考核样品检测，并把实习考核样品检测结果按要求尽快email 给study Director，Study Director将在48小时内回复实习考核样品的评判结果。Study Director提醒：请注意对考核样品，无论是回收率、RSD、离子丰度还是R2值，任一指标不达标的数量，超过总数的30％，原则上就不能再继续做正式协同研究样品。为此，协同研究参加者应该具备以下实验技术和经验：(1) 熟练的农药残留分析样品制备技术；(2) 熟练的gc-MS, gc-MS/MS and LC-MS/MS检测技术和经验（操作经验，故障判断经验，维修保养经验）；(3) 精确的质谱解析技术。17. 协同研究完成的期限和要求当AOAC农药化学污染物委员会批准我们的这个protocol之后，我们用两个月的时间，在世界范围内征招协同研究参加者，力争有15个国家和地区20-30个实验室参加。参加实验室确定之后，我们马上准备预协同研究和正式协同研究所用的标准溶液、添加溶液及相关实验耗材等，并一次用特别快递寄给参加者。从这些实验材料由中国寄出之日算起，要求参加者在3个月内结束这项国际AOAC协同研究。同时，还要求参加实验室当16个协同研究样品测试完毕后，除把实验结果表等及时传给Study Director 之外，也别忘了将使用本方法发现的问题和建议也写在你的意见栏内。协同研究参加者收到协同研究材料后，须立即检查收到的实验材料与供货清单是否相符，材料是否完好，并填写好材料接收表（见附件表1-1和表1-2），E-mail或传真给Study Director。自实验材料收到之日起，最迟要在2个月内完成全部样品的分析任务。18. 安全注意事项本实验中所用乙腈、甲苯等有机试剂对人体有一定潜在危害。因此特别提醒，实验时应戴乳胶手套，在通风良好的环境中小心操作。19. 希望、要求和承诺Study Director希望能有15个国家和地区、每个方法(gc-MS,gc-MS/MS 或LC-MS/MS)有20-30个以上的实验室参加这项协同研究。Study Director要求参加实验室实验材料收到后80天内完成这项协同研究，并将分析结果数据表、谱图和原始记录和你对这个方法的意见或建议等寄给Study Director。Study Director承诺在协同研究期间，对参加者提出的技术问题，保证在48小时之内给予答复；对其它问题，若有可能也会全力帮助解决。20. 通讯联系AOAC 协同研究期间，参加者可与Sdugy Director通过以下方式随时取得通讯联系：传真：+86-335-599-7608 Email：qhdciqgfpang@yahoo.com.cn21. 参考文献(1) http://www.flworkshop.com/Community/pesticides.html (2) Document No. SANCO/10684/ 2009“Method Validation and Quality Central Procedures for Pesticide Residues Analysis in Food and Feed(3) AOAC Guidelines for single laboratory validation of chemical methods for dietary supplements and botanicals(4) Youden W.J.& Steiner E.H.(1975) Statistical Manual of the AOAC, Arlington, VA.USA(5) Standardization Administration of P.R.China (2008) GBT 23204-2008 , Determination of 519 pesticides and related chemicals residues in tea—gc-MS method(6) Standardization Administration of P.R.China (2008) GB/T 23205-2008, Determination of 448 pesticides and related chemicals residues in tea—LC-MS-MS method(7) High-Throughput Analytical Techniques for determination of 653 multi-Classes and multi-Kinds of Residue Pesticides and Chemical Pollutants in Tea. Part I: The Tentative Probe into the Analytical Techniques of Multiresidues in Tea (J.AOAC Int. Manuscript ID-10-0008R.1)(8) High-Throughput Analytical Techniques for determination of 653 multi-Classes and multi-Kinds of Residue Pesticides and Chemical Pollutants in Tea. Part II: Comparative Study of Extraction Efficiencies of the Three Sample Preparation Techniques (J.AOAC Int. Manuscript ID-10-0215R.1)(9) High-Throughput Analytical Techniques for Determination of 653 multi-Classes and multi-Kinds Residue Pesticides and Chemical Pollutants in Tea. Part III: The Evaluation of the Cleanup Efficiency of SPE Cartridge Newly Developed for Multiresidues in Tea (J.AOAC Int. Manuscript ID-10-0251R.1)(10) High-Throughput Analytical Techniques for Determination of 653 multi-Classes and multi-Kinds Residue Pesticides and Chemical Pollutants in Tea. Part IV: Key Control Points and Error Analysis of AOAC collaborative Study Method (已形成初稿)(11) High-Throughput Analytical Techniques for Determination of 653 multi-Classes and multi-Kinds Residue Pesticides and Chemical Pollutants in Tea. Part V: Establishment of AOAC Collaborative Study Pesticide Degradation Kinetic Equations and Prediction for Detected Values of Multiresidues of Collaborative Study Samples (正在撰写中)22. 致谢感谢北京安捷伦公司提供了Agilent 7890A/5975C gc-MS、Agilent 7890A/7000B gc-MS/MS 和Agilent 1200/6430 LC-MS/MS三台仪器，无偿支持这项研究。感谢北京艾杰尔公司在这项研究中与我们合作开发了新型茶叶多残留净化SPE柱Cleanert TPT。
附件：表1-1. Materials Receipt Form for Collaborative Study by gc-MS (gc-MS/MS)![]()
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