实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8043195今日发帖：419 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
乳制品检测
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【原创】单向免疫扩散法检测牛初乳活性度

浏览0 回复45 电梯直达
Jun Nan Li
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2014/01/02 21:07:47 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被马踏飞燕设置为精华； 奖励积分记录： 马踏飞燕(20分)
样品处理

称取生鲜牛初乳大约10.0g（牛初乳粉称取大约1.0g），用少量0.01mol/L PH 6.8磷酸盐缓冲溶液溶解后，移至100ml容量瓶定容，然后将稀释后的样品溶液于5000-10000rpm 离心 5-10min，脱除脂肪、酪蛋白，取上清液用0.01mol/L PH6.8 （渗透压PH值）磷酸盐缓冲溶液进行一定倍数的稀释（参考范围2-30倍），配制成IgG含量大约为200μg/mL的溶液，再进行测定。

琼脂平板的制备

将琼脂培养基加热熔化，冷却至52-55℃,在保温状态下加入抗血清（抗血清效价为1：32）,每15ml琼脂中加入0.15-0.2ml抗血清。轻轻摇动混匀（防止产生气泡），铺板，冷凝后用打孔器打孔，每两空间的间距控制在1.5-2.0cm左右，每孔与平皿壁相距1.0cm左右。每个平皿可以打13个孔，打完后用酒精灯微加热封底（使培养基与玻璃板牢固结合）后待用。



3 点样与培养

准确称取1.0mg 标准IgG，加入0.01mol/LPH 6.8磷酸缓冲溶液1.0ml，充分溶解、摇匀后配成浓度为1.0mg/mlIgG标准液，然后再用磷酸缓冲溶液梯度稀释，分别配成100、50、25、12.5、6.25mg/100ml浓度的系列标准液（各0.5ml），用于标准曲线的绘制。

取不同浓度的（100、50、25、12.5、6.25mg/100ml）IgG标准溶液10.0μL和不同稀释倍数的样品稀释液各10.0μL分别加入平皿中的各孔内，同样做三个平行式样，置于湿盒中37℃扩散24小时后，用游标卡尺准确测量沉淀环的直径。样品沉淀环以较大稀释倍数且直径落在标准曲线内为准。(周围孔中加稀释后的初乳)



4 .结果

以标准样品IgG浓度（mg/100mg）的lg对数为纵坐标（对数坐标），对扩散环直径d2（mm,横坐标）作图，绘制半对数标准曲线（拟合成直线）。根据样品沉淀环直径，从标准曲线上读取样品浓度值C（mg/100mL），再用下式计算：

样品IgG的百分含量（%）=[(C×样品稀释倍数)/样品重量(g)]×0.1



版友们都是怎么做的呢？ 结果如何呢？ 可以讨论讨论

为您推荐
近期热榜
热门活动
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
选参数 看心得 找厂商 查方案
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
马踏飞燕
langhuashang
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/2 21:35:11 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这是相当好的一篇原创作品啊，可惜没做过，不能参与讨论，推荐了
该帖子作者被版主 yqfxy加 1积分， 2经验，加分理由：积极回复
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
指尖质检
v2786225
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/3 21:21:36 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
制平板的时候很容易出起泡的。
该帖子作者被版主 yqfxy加 1积分， 2经验，加分理由：感谢参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
道琼斯
v2786182
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/3 21:46:38 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个没有做过，真是学习了，支持一下吧。
该帖子作者被版主 yqfxy加 1积分， 2经验，加分理由：感谢参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
自营牧场
v2786032
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/3 22:03:17 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没做过呀，为微生物方面的都不懂。
该帖子作者被版主 yqfxy加 1积分， 2经验，加分理由：感谢参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
矛盾
v2786193
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/4 20:44:43 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个原创大赛的话 效果就更好啦。
该帖子作者被版主 yqfxy加 1积分， 2经验，加分理由：感谢参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
独一无二
v2835076
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/4 20:59:48 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
单向琼脂扩散实验又称单向免疫扩散试验，是指可溶性抗原在含相应抗体的琼脂介质中的扩散，当两者以等价浓度相遇时，即形成明显的沉淀环。在一定的抗体浓度下，沉淀环的直径与抗原浓度的对数在一定扩散温度和时间范围内成直线关系，因此采用改方法可用于抗原的定量测定。以沉淀环直径为横坐标，相应孔中抗原量的对数值为纵坐标，绘制标准曲线，待测标本中的抗原量即可从标准曲线中查出。
该帖子作者被版主 yqfxy加 3积分， 2经验，加分理由：感谢参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
三千甲士
v2673431
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/4 21:05:34 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
活性度就是我们平时做的效价吧。
该帖子作者被版主 yqfxy加 1积分， 2经验，加分理由：是的
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
谁能检测土豪成分
v2786304
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/4 21:17:15 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个实验看过老师做过，需要用湿盒。
该帖子作者被版主 yqfxy加 1积分， 2经验，加分理由：感谢参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
小兔子爱吃
v2834575
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/4 21:19:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三千甲士(v2673431) 发表:
活性度就是我们平时做的效价吧。
效价实验只有液态奶做，奶粉没做过。
该帖子作者被版主 yqfxy加 1积分， 2经验，加分理由：感谢参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
精锐
v2831070
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2014/1/4 21:26:48 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
梅花打孔器
该帖子作者被版主 yqfxy加 1积分， 2经验，加分理由：感谢参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
手机版： 单向免疫扩散法检测牛初乳活性度
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁