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毛细管电泳（CE）
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主题：【原创】【每周读报】单细胞分析--CE无可取代地位之体现！

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nini2006
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发表于：2014/01/20 21:00:45 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
题名：自动化毛细管电泳的快速单细胞分析（Automated Capillary Electrophoresis System for Fast Single-Cell Analysis）

作者：Alexandra J. Dickinson , Paul M. Armistead , andNancy L. Allbritton （一群美国滴家伙）

杂志：Analytical Chemistry

年卷页： 2013, 85 (9), pp 4797–4804

正文：

毛细管电泳在单细胞分析上显示了其独特而强有力的优势，这是HPLC和UPLC等难望其项背的优势之一。以下就给大家介绍一个该项技术在单细胞分析上的应用，很牛很强大~ 为了介绍全面一点，我把整段摘要给翻译了。

毛细管电泳用于单细胞分析是一种非常有前景的技术，但是在生物研究上其具有低通量的局限性。本文提出了一个微型细胞捕获器和三通道体系的自动化分析平台，在该系统上可进行快速缓冲液交换以进行快速单细胞分析。导入的细胞跟荧光素和俄勒冈绿一起被分离分析，通量为3.5 细胞/分，荧光素和俄勒冈绿的分离度为2.3±0.6。细胞蛋白激酶B（PKB）的活性是通过检测免疫荧光染色后的二氧膦基-PKB来检测的。结果显示，PKB在并没有变化，说明在CE分析过程中应激活化蛋白酶没有被上调，而且在细胞溶膜之前基底细胞的生理机能也没有被扰乱。在癌细胞中鞘氨醇激酶(SK)通常情况下是会被上调的。在此实验中，通过将神经胺-荧光黄(SF)基底引入细胞中而对SK进行检测。SF、神经胺-1-磷酸荧光黄（S1PF）和1/3荧光种类在单细胞中得到分析。219个细胞中，单细胞通量为2.1细胞/分钟。虽然这些亚种群细胞（此类细胞SK活性差异很大，这些差异跟种群均值有关）很容易被测定到，但88%的细胞具有上调SK的活性。该系统稳定，重现性好，可用于上百个贴壁和非贴壁细胞的生物组分的分离分析；还可用于检测非表征的生物学现象。

生物方面的知识翻译起来颇费功夫，有些地方翻译得不一定地道。不过生物知识在这里不是重点，亮点在仪器上。比如微型细胞捕获器，这个装置至于毛细管入口端上面50微米处，那个三通道系统也一副牛掰哄哄的样子。如下图：



其他参数：

溶膜方式：激光脉冲

生理盐水和分离缓冲液的控制方式：接地电位

进样方式：电动进样（-5kV，1s），此时横跨毛细管的电压设为0，1s，毛细管被从air gap移动到分离缓冲溶液中。

结语：如果没有多年的科研积累和强大的平台是做不出这样的实验的。纵观这两年发到AC上的文章，动则CE-MS，剩下的就是类似这种：需要很多电化和物化知识外加搞技术难度的仪器创新。革命尚未成功，同志们需多努力啊~~~~~~~
附件：
2013-AC-single cell-CE.pdf
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2014/1/21 9:42:28 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个国内有研究么？
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nini2006
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2014/1/21 10:40:32 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 社区=冬季=(lylsg555) 发表:
这个国内有研究么？
现在这个研究在国内已经很普遍了，03年的一个综述中是这么说的：

“国内在单细胞分析方面起步较晚, 力量分散, 发展较缓慢。目前承担国家自然科学基金资助课题的单位( 按资助年代先后为序) 有武汉大学、山东大学、中国科技大学北京研究生院、中国科学院化学研究所、北京大学、中国科学院大连化学物理研究所、南京大学、广西师范大学等。”
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nini2006
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2014/1/21 10:42:01 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
单细胞研究的意义：
细胞是生物体结构和生命活动的基本单元。在单个细胞水
平上进行研究, 可以获得反映细胞生理状态和过程的更准确、
更全面的信息, 还可以使人们能更好地了解细胞群体中某些特
殊的细胞功能, 更深人地认识细胞个体差异、细胞间相互作用
和信息传递以及神经递质、药物或毒物刺激的生理影响等更深
层次的信息。因此, 单细胞分析技术的研究与发展具有重要意
义。
该帖子作者被版主 xsh6743加 5积分， 2经验，加分理由：感谢分享，一比，我们简直就是杀鸡用牛刀
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ericwong
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2014/1/23 8:27:04 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
10年前，我的一个同学就开始做单分子方面的检测。后来简单点，又做单细胞。当时用的激光器的功率都是不小的。
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nini2006
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2014/1/23 11:03:43 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ericwong(ericwong) 发表:
10年前，我的一个同学就开始做单分子方面的检测。后来简单点，又做单细胞。当时用的激光器的功率都是不小的。
10年前应该来说国内在这方面的研究还不是很成熟的。
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ericwong
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2014/1/23 12:30:48 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
平台、激光器，检测装置等等，各种东西都是自己最后集成搭起来的
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flysky97
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2014/1/27 15:21:11 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
噢，之前看过一个非常复杂的微流控芯片仪器……
这个设计倒是蛮简单的……
我们实验室做过类似的装置，采用高压电脉冲溶膜，不过不容易操控单个细胞……

楼主的点评和分析非常棒……

真正有画龙点睛的作用！

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2014/1/27 15:23:51 Last edit by flysky97
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2014/1/27 15:28:54 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 flysky97(flysky97) 发表:
噢，之前看过一个非常复杂的微流控芯片仪器……
这个设计倒是蛮简单的……
我们实验室做过类似的装置，采用高压电脉冲溶膜，不过不容易操控单个细胞……

这篇楼主忘了传原文啦？AC的文献一般坛友可能都下载不到的——如果这样的帖子兼具免费下文献的功能——那更不错……

楼主的点评和分析非常棒……

真正有画龙点睛的作用！

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该帖子作者被版主 nini2006加 3积分， 2经验，加分理由：谢谢提醒
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2014/1/27 15:49:12 Last edit by flysky97
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2014/1/27 17:57:40 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 flysky97(flysky97) 发表:
噢，之前看过一个非常复杂的微流控芯片仪器……
这个设计倒是蛮简单的……
我们实验室做过类似的装置，采用高压电脉冲溶膜，不过不容易操控单个细胞……

楼主的点评和分析非常棒……

真正有画龙点睛的作用！

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溶膜技术不难，最难的是操控单个细胞。这个技术解决了，其他都好办。这个装置的巧妙之处就是用电压操控毛细管进样端，使其在样品区和缓冲溶液区之间不断往复。不过我觉得这样容易进气泡。
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