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主题：【讨论】叶绿素的测定，我达不到规范上的要求

浏览0 回复17 电梯直达

东北生长的苹果

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发表于：2014/01/21 15:28:17 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我用的是水利的叶绿素测定规范。

要在-40度的冰箱里折腾三次，这把我的手给冻的。

注意看11.4和11.5，我的750波长吸光度值超过了0.005，而664波长的吸光度值根本达不到0.1，至于再将提取液稀释或者更换比色皿，我就更不明白了。

该帖子作者被版主 郭景祎加 2积分， 2经验，加分理由：话题

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2014/1/21 23:13:15 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

对于750nm吸光度的规定，主要是担心离心效果不好，提取液浊度会影响测定。不过叶绿素的计算公式中，其他波长处的吸光度要减去750nm处的吸光度后再参加计算，不知水利版的方法是否如此？

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2014/1/21 23:24:41 Last edit by yzhlai

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2014/1/21 23:23:59 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

至于664nm处吸光度的要求，主要考虑采用比色法时，吸光度太小或太大均不利于准确测定；某物质的浓度与吸光度在一定范围内才存在线性关系，超过这个范围，他们的关系就不是原来的比例关系了；
跟其他比色法测定项目的定量上、下限的含义类似，即采用某标准曲线定量时，当测得浓度在该曲线的定量下限至定量上限间比较可靠。

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快乐鱼

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2014/1/22 8:33:38 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

这个没做过，暂时就不发表看法了

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东北生长的苹果

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2014/1/22 10:09:58 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 谁折腾(yzhlai) 发表:

对于750nm吸光度的规定，主要是担心离心效果不好，提取液浊度会影响测定。不过叶绿素的计算公式中，其他波长处的吸光度要减去750nm处的吸光度后再参加计算，不知水利版的方法是否如此？

我的滤膜不是玻璃纤维滤膜，而且离心管是塑料的，所以溶液有些混浊，下个月打算换一下试试。

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东北生长的苹果

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2014/1/22 10:18:32 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 谁折腾(yzhlai) 发表:
至于664nm处吸光度的要求，主要考虑采用比色法时，吸光度太小或太大均不利于准确测定；某物质的浓度与吸光度在一定范围内才存在线性关系，超过这个范围，他们的关系就不是原来的比例关系了；

跟其他比色法测定项目的定量上、下限的含义类似，即采用某标准曲线定量时，当测得浓度在该曲线的定量下限至定量上限间比较可靠。

这个波长，我无论如何都达不到0.1，我也不知道为什么达不到

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luckyxiaoyu

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2014/1/22 11:08:17 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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2014/1/22 11:10:19 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

664达不到0.1是因为提取液浓度不高，离心的方法很难做到750小于0.005，我用这个装置分离出来的提取液就很清澈了

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辛妈

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2014/1/22 13:29:36 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你是不是用的1CM的比色皿？可以更换更大一点的，比如4cm，吸光度肯定会提高的。

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2014/1/22 13:29:58 Last edit by lsq521

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2014/1/22 13:33:23 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 东北生长的苹果(majing04) 发表:
我的滤膜不是玻璃纤维滤膜，而且离心管是塑料的，所以溶液有些混浊，下个月打算换一下试试。

离心管材质没关系的，主要是离心的转速要大些

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2014/1/22 13:38:44 10楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 东北生长的苹果(majing04) 发表:
原文由 谁折腾(yzhlai) 发表:
至于664nm处吸光度的要求，主要考虑采用比色法时，吸光度太小或太大均不利于准确测定；某物质的浓度与吸光度在一定范围内才存在线性关系，超过这个范围，他们的关系就不是原来的比例关系了；

跟其他比色法测定项目的定量上、下限的含义类似，即采用某标准曲线定量时，当测得浓度在该曲线的定量下限至定量上限间比较可靠。

这个波长，我无论如何都达不到0.1，我也不知道为什么达不到

达不到就改用光程较大的比色皿，比色皿的光程有参与浓度计算，所以不用担心不同样品所用的比色皿不同（Chl a的测定与其他带标准曲线的比色法是不一样的，其他带标准曲线的比色法一般要求保持比色皿的光程不变）

如不同样间比色皿的光程不同，则应单独计算浓度

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