主题：【第七届原创】高效液相色谱法对土三七的质量研究

高效液相色谱法对土三七的质量研究

    土三七别名见肿消、乳香草、奶草、泽兰、叶下红、散血草、和血丹、天青地红、破血丹、血牡丹、三七草、九头狮子草、白田七草、血当归、红背三七、散血丹、血三七、菊叶三七、水三七、紫背三七、狗头三七。

    药材基源：为菊科植物菊叶三七的根或全草。

    【性味】味甘；微苦；性温

    【功能主治】止血；散瘀；消肿止痛；清热解毒。主吐血；衄血；咯血；便血；崩漏；外伤出血；痛经；产后瘀滞腹痛；跌打损伤；风湿痛；疮痈疽疔；虫蛇咬伤

对于土三七的文晓报道较少，本试验旨在建立土三七的质量分析方法，为土三七的进一步药学研究建立可控性指标。

    材料及方法

    仪器：

安捷伦1200高效液相色谱仪，diamonsil色谱柱5um，150×4.6（mm）

；十万分之一分析天平（梅特勒托利多）；电热恒温干燥箱（上海）。

材料：

土三七购自于药店。经去离子水漂洗去浮尘与污物，于干燥箱中65℃干燥，粉碎机粉碎，置干燥器中备用。

试剂：

山奈酚对照品(中国药品生物制品检定所)。冰醋酸、乙腈（色谱纯）。

试验方法

色谱条件:色谱柱：diamonsil色谱柱5um，150×4.6（mm）,流动相:乙腈-水-冰醋酸提速洗脱;柱温37℃，检测波长360nm，流速1.0mL·min^-1，进样量20μL。

梯度洗脱条件：

对照品溶液的制备：

精密称取一定量的山奈酚对照品，用甲醇溶解制成标准储备液，山奈酚对照品溶液浓度分别为1.50mg·mL^-1。

供试品溶液的制备：

取药材粉末，用分析天平准确称取5份，质量分别为，分别置于50ml比色管中，加入25ml50%甲醇水溶液，浸泡1h超声提取40min。静置分离，吸取上清液，在残渣中继续加入25ml50%甲醇水溶液，超声提取40min，静置吸取上清液，合并二次提取液，定容至100.00ml备用。

标准曲线：

取山奈酚的标准贮备液(1.50mg·mL^-1)适量，用流动相等比稀释调配（1、2、4、8、16）的系列对照品溶液，测定峰面积,以峰面积为纵坐标(A),对照品浓度(mg·mL^-1) 为横坐标(c) ,绘制标准曲线,得回归方程。

2.5样品含量测定精密吸取上述供试品溶液，进样20μL，在上述色谱条件进行测定，代入回归方程，计算样品含量。

方法学考察

色谱系统适用性在以上色谱条件下检测，得到山奈酚的保留时间，结合峰面积计算各自理论塔板数。

精密度试验取同一对照品溶液,按上述色谱条件连续进样6次,计算山奈酚的RSD值。

重复性试验平行制备5份供试品,按上述色谱条件进行测定,计算山奈酚的RSD。

3.4 稳定性试验取供试液,隔2h测一次,共测6次,考察样品的稳定性。

3.5 回收率试验称取一定量的已测定含量的药材，分别加入一定量山奈酚对照品溶液，制备供试液，测定, 计算山奈酚回收率。

结果

1  山奈酚对照品及土三七药材的高效液相分离图谱如下：

2  标准曲线和线性关系山奈酚标准曲线（见下图）.回归方程为A=2305c+18.45,r=0.9997,结果表明山奈酚在0.08～1.28mg·ml^-1范围内线性关系很好。

3  精密度试验山奈酚的RSD分别为1.3%，结果表明精密度良好。

4  重复性试验山奈酚的RSD分别1.5%，结果表明重复性良好。

5  稳定性试验供试液中山奈酚在10h内稳定，RSD为1.4%。

6  回收率试验山奈酚回收率为98.53%,符合方法学要求。

7  样品含量测定结果 样品含量测定精密吸取上述供试品溶液，进样20μL，在上述色谱条件进行测定，代入回归方程计算，的土三七中山奈酚含量为85ug/g。