液相色谱中死时间几种测定方法1:有响应的溶剂出峰时间为死时间。
2:进样后的阀切换峰,对应的时间为死时间。
3:工作站中输入色谱柱的空余体积或孔隙率,自动计算。(对于C18柱,也可以用硝酸钠或硫脲等在色谱柱上完全不保留组分的出峰时间来测定死时间。)
影响分离度的因素有三个因素控制两个色谱峰之间的分离度——容量因子,选择性,柱效
容量因子反映样品分子和固定相及流动相之间的作用力,选择性是说明色谱系统区分两个或多个色谱峰的能力,柱效与色谱峰的宽度有关,很明显要达到一定的分离度,宽色谱峰要比窄色谱峰需要更大的分离度选择性。
理论塔板数越高柱效越高,柱效的高低受柱内效应和柱外效应的影响。
选择性是固定相区分两个被分离样品组分的能力,用容量因子之比进行计算,它是两个被分离色谱峰顶点距离的量度,如果选择性是Ⅰ,则两个组分完全不能分离。选择性数值越高,分离越好。
由于选择性取决于被分离物的物理和化学结构,流动相和固定相,流动相组成,PH,色谱柱温度,流动相添加剂,因此,尽量优化实验条件提高选择性以降低成本。
容量因子为物质的特性,当分析条件一定时,容量因子为固定值。
溶剂的洗脱强度与其极性有关:反相色谱:溶剂的极性越强,洗脱强度越弱。
正相色谱:溶剂的极性越强,洗脱能力越强。(注意:不可以使用纯水作为正想色谱的流动相)
一般样品分析要求:容量因子大于2小于5