主题：【微聊周汇】蜂哥花弟 桃园结义——0404

花儿开了，蜂儿来了，披着晨光，臭着花香，离开营房，飞向远方......
飞呀，飞呀......终于飞到了目的地，轻轻地附在花蕊上准备采蜜，这时花儿向蜂儿提问题，蜂儿直奔主题也不回避，映照了和谐友好的气氛！
花儿：液相走空白总有干扰峰？
蜂儿：1：针里有残留或者旁路污染了，洗针液脏了或者流动相有问题。
          2：溶剂不纯。
          3：走低压梯度，有机相的比例大的时候有干扰峰——就是气泡峰。有机相比例增大，水中气体溶解度降低，析出就成气泡，所以，干扰时有时无。用了一个小装置接在混合器后面就解决了。
          4： 同一个色谱柱，同一台仪器，同一流动相。两个方法，运行梯度，用另一个方法就没有系统峰——只改变方法，如果是污染的话，不会有改变。
          5：很大一部分是水的问题，走梯度对流动相要求还是比较高的。
          6：基质在柱中残留——用纯甲醇大体积冲洗或者换根柱子试试是否是色谱柱污染。
花儿：检测组分目标物含量应如何设定波长？
蜂儿：做含量的波长一般不是目标物最大的吸收波长，而是取最大吸收波长附近，一般情况取比其截止波长大20的波长设置。
花儿：不同的柱子接口对检测有何影响？
蜂儿：接口并不通用，特别是uplc！即使能拧上去，还涉及到死体积，会影响峰形和峰宽。比如：菲罗门的柱子,接口是通用的；Waters的仪器可能不通用，特别是waters和岛津的柱子不合用，菲罗门的我用在waters上还ok。
花儿：PH值不同对色谱峰保留时间的影响——药典的方法：流动相是4%冰醋酸和乙睛52:48，有温控的条件下，走出来的标准品保留时间每天都不一样，而且错的还比较大，从14.0到14.9，想请问下是怎么回事？
蜂儿：1：流动相要混合充分，乙酸含量有点高，pH会影响保留时间。
          2：这么高的醋酸比例,要明天换新的——酸会挥发，可能会长菌。
          3：在分析的组分有保留的情况下，对于酸性的组分，流动相pH值的增加，会使其保留时间缩小。对于碱性的组分，流动相pH 值的增加，会使其保留时间增加。中性的组分，其保留时间不受流动相pH 值变化的影响。
花儿笑了，蜂儿高兴了，
蜂儿说：你产粉，我采蜜，从此我们就是好兄弟。
花儿答：你是蜂哥，我是花弟，今天我们“三结义”。
蜂儿说：虽然只是初次相遇，我们永远不离不弃。
花儿答：蜂哥的大气，我深表敬意，今天做个答题游戏，加深彼此兄弟情谊。
蜂儿说：希望花弟不要客气，你的问题我绝不回避。
花弟说：外标法怎么计算物质的纯度？不是只能计算培养的浓度吗？
蜂哥答：外标法：校正因子=标样实际称重*含量(99%)/标样峰面积。样品含量=样品峰面积*校正因子/样品称重。这是含量，不是纯度。含量检测设置的波长是分析组分中目标物的截止波长(即最大吸收波长)附近的波长，在此波长下，只考虑目标物具有最大响应和最高的灵敏度，而其它组分并不一定具有紫外吸收而被检测出峰。
          如果采用面积归一，就尽量采用大部分物质都有吸收都会出峰的波长。比如254那种。选择怎么样的定量方法，从根本上决定了这个检测方法是否可以采信，在我们这个领域，没有存在就是合理这东西。
花弟再说：如果不接柱子走一个纯物质，检测器上出来的是什么图？
蜂哥再答：当不接柱子并且连接没有死体积时，在检测条件下，进单一组分的色谱峰出峰很快而且对称。
花弟又说：流動相是磷酸二氫鉀水溶液：甲醇=99:1，維c的標跑出后肩峰。
蜂哥又答：减小进样量，改善酸碱性，柱子填料是否塌陷，样品在流动相里的溶解性等。
花弟：（花弟有点不好意思了，不过还是不客气的又提出了新的问题）同一台仪器换了不同的色谱柱，进到4.5针样，时间大概飘了0.5min，有柱温箱，柱压也是稳定的，保留时间一直往前漂？
蜂哥：保留时间一直往前漂(反相色谱分析)——有柱温箱，压力稳定。
          1：室温升高——泵压有降低的趋势。
          2：酸性分析物，流动相pH值升高；碱性分析物，流动相pH值降低——缓冲盐比例发生了微小变化。
          3：洗脱增强——有机相比例缓慢增加。
蜂儿吮吸着花蜜，花儿传递着情谊，蜂儿带着收获准备离去，花儿再次深表敬意——彼此之间都有收获，花儿蒂落结果，蜂儿采粉做蜜，但愿再次相遇！
花弟期待着与蜂哥的再次相遇......