主题：【第九届原创】离子色谱分析寡糖时保留时间漂移故障排查

离子色谱是液相色谱的一种，但常规中低端主机系统配置的均是等度泵，配合淋洗液发生器可实现复杂样品中阴阳离子的梯度洗脱。但糖和氨基酸类的分析需要用到水、NaOH和NaAc三种不同种类流动相的比例混合梯度，此时，需要用到类似于液相的四元梯度泵系统。对于四元梯度系统来说，保留时间的漂移原因相对比等度系统要多。本文仅介绍在一次寡糖分析时碰到保留时间漂移时的故障排查思路。
一次用Thermo的CarboPac PA20做单双糖和寡糖分析实验中碰到保留时间不稳定的现象。通常情况下用PA20做糖分析时，如果洗脱程序是低浓度NaOH（小于100mM）等度洗脱，还需要在洗脱程序后面加5-10min的清洗程序（一般用200mM的NaOH溶液），然后再恢复到初始洗脱浓度平衡，否则，系统中残留的由样品或流动相引入的CO₂会影响待测糖的保留时间。本次实验由于需要做寡糖，在流动相中加入了洗脱能力更强的NaAc溶液，足以消除CO₂对保留时间的影响，但在系统充分平衡后仍存在如图1所示的漂移现象，难道哪里出问题啦？

图1，保留时间漂移谱图

首先检查氮气减压阀，看压力指数是否在正常范围内。在此次分析用到的三种不同的流动相中，由于NaOH溶液是强碱性溶液，在空气中放置时容易吸收空气中的CO₂，使洗脱效果发生变化。为防止NaOH受空气中CO₂的干扰，常常需要在盛NaOH溶液的流动相瓶口加氮气保护（如图2，瓶口蓝色管路为氮气管线），氮气减压阀一般调到3-6psi为宜，当压力过大时会影响泵的正常工作，从而导致保留时间漂移。但检查减压阀，压力指数正常啊。

图2、加氮气保护的流动相瓶

接下来怀疑是流动相没有混匀或流动相配制原因，重新用新的50%NaOH溶液和NaAc配制并充分混匀后仍有漂移。
既然不是氮气和流动相的原因，会不会是比例阀出了故障呢？于是手动配了份NaOH和NaAc混合溶液，走100%的A通道，重复进了几针标准品，重复性竟然很好，见图3.基本可以断定是比例阀出了问题，于是打了400报修电话，维修工程师第二天就上门了，工程师换好比例阀以后，配制了新的流动相梯度洗脱走出的谱图见图4，终于恢复了良好重现性，心情大好，接着实验，顺便赞一下赛默飞的售后响应速度哈。

图3、100%A通道谱图

图4、新换比例阀之后的谱图