1. 所用缓冲盐杂质过多(滤后会发现有很多黑渣,尤其是国内产品),建议每次少率一些,经常换膜,或者换用进口缓冲盐;再者,PBS存放时间过长,出现菌落,导致流速较慢;其次,盐浓度过高也是影响流速的原因。
2.缓冲盐浓度有点高,但是上到0.1也尝试过,问题不大?
3. 测试前,要将准备走PBS的通道先用纯水冲先冲洗30min?比如准备用A:PBS,B:乙腈,实验开始的时候先用乙腈稳定仪器30min,再用A:水,B:乙腈冲洗30min;然后用和实验条件一样的流动相配比平衡柱子1h,然后进样。此次实验中因为有PBS,应该用纯水冲洗A通道30min,此时的冲洗条件-乙腈和水的比例逐渐改变为与测试比例一致,并进行平衡。
4. 实验结束后,也需要用纯水冲洗PBS通道。直接将通PBS的通道换成纯水,然后水:乙腈=65:35冲洗30min;再用水:乙腈=95:5冲洗30min, 再用乙腈冲洗30min。最后将色谱柱保存在纯乙腈中
5.两天两次相同条件的实验,我就测一个纯的HPLC级的物质,出峰时间由7.2min推迟到8.2min左右。色谱柱平衡不够;缓冲盐的配制有差异。