GPC——样品在辐射降解下谱图曲线几乎无变化?不知如何分析
本人新手刚刚GPC上手,目前正在进行多糖的辐射降解后分子量的测定的工作,GPC的参数是:柱温40,流速0.50,流动相0.2mol/LNaCl溶液,样品和标准品浓度2mg/ml,进样体积60μL,色谱柱SB-806HQ(排阻极限2*10^ 7)。
上面的图为标准品的色谱图,下面那张图是我样品的图。样品色谱图并没像文献内的峰型,保留时间也不一样,感觉除了未辐射降解的色谱图曲线有所区别之外,其余的都差不多,也不知从哪儿切峰,随之计算出的Mw也不对。
麻烦各位老师帮忙看下,我的问题出在哪儿,在下感激不尽!
原文由 小不董(doxw0323) 发表:
楼主上面几个分子量的色谱峰溶剂峰的保留时间要确认下,因为在20min时你的目标物在这个时间是正峰,是因为你样品中含有高盐物质或者小分子物质,如果有条件需要改进。
再就是你的样品,保留时间有明显出峰早很多的,说明有比标样大很多的高分子物质,降解后,14min的色谱峰减弱到没有。但14min的色谱是否超过你GPC分析范围,需要再确认。
原文由 王大虎(Ins_c8a84430) 发表:那你可以用盐浓度低一点的水溶液来溶解,看是否出现倒峰,或者就用这0.2mol/L的NaCl溶液进一针来确认是否是溶剂峰,这个正峰和倒峰的时间是否一致。
谢谢您的解答,我现有几点疑惑,劳烦再问您一下。
首先流动相是0.2mol/L的NaCl溶液,而样品和标准品也是流动相 0.2mol/L的NaCl溶液配制的,但是测出来的溶剂峰,一个是正峰,一个是倒峰,是不是因为我的流动相的盐浓度过高了。
其次我的样品的相对分子质量是80W左右,降解后应该在14min之后也会出现几个峰,可是它只有在17min,19min,20min出现三个峰,然后17min和19min还出现了一种趋势:随着辐照剂量的增大,它们的保留时间有往前走的趋势,我没理解错的话就是分子量逐渐变大了,不是很符合辐射降解后分子量越来越小的趋势。