主题:【已应助】GPC——样品在辐射降解下谱图曲线几乎无变化?不知如何分析

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王大虎
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GPC——样品在辐射降解下谱图曲线几乎无变化?不知如何分析

        本人新手刚刚GPC上手,目前正在进行多糖的辐射降解后分子量的测定的工作,GPC的参数是:柱温40,流速0.50,流动相0.2mol/LNaCl溶液,样品和标准品浓度2mg/ml,进样体积60μL,色谱柱SB-806HQ(排阻极限2*10^ 7)。
        上面的图为标准品的色谱图,下面那张图是我样品的图。样品色谱图并没像文献内的峰型,保留时间也不一样,感觉除了未辐射降解的色谱图曲线有所区别之外,其余的都差不多,也不知从哪儿切峰,随之计算出的Mw也不对。
      麻烦各位老师帮忙看下,我的问题出在哪儿,在下感激不尽!



葡聚糖标样

多糖样品
推荐答案:小不董回复于2022/04/23
楼主上面几个分子量的色谱峰溶剂峰的保留时间要确认下,因为在20min时你的目标物在这个时间是正峰,是因为你样品中含有高盐物质或者小分子物质,如果有条件需要改进。
再就是你的样品,保留时间有明显出峰早很多的,说明有比标样大很多的高分子物质,降解后,14min的色谱峰减弱到没有。但14min的色谱是否超过你GPC分析范围,需要再确认。
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楼主上面几个分子量的色谱峰溶剂峰的保留时间要确认下,因为在20min时你的目标物在这个时间是正峰,是因为你样品中含有高盐物质或者小分子物质,如果有条件需要改进。
再就是你的样品,保留时间有明显出峰早很多的,说明有比标样大很多的高分子物质,降解后,14min的色谱峰减弱到没有。但14min的色谱是否超过你GPC分析范围,需要再确认。
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王大虎
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原文由 小不董(doxw0323) 发表:
楼主上面几个分子量的色谱峰溶剂峰的保留时间要确认下,因为在20min时你的目标物在这个时间是正峰,是因为你样品中含有高盐物质或者小分子物质,如果有条件需要改进。
再就是你的样品,保留时间有明显出峰早很多的,说明有比标样大很多的高分子物质,降解后,14min的色谱峰减弱到没有。但14min的色谱是否超过你GPC分析范围,需要再确认。


谢谢您的解答我现有几点疑惑劳烦再问您一下

首先流动相是0.2mol/LNaCl溶液而样品和标准品也是流动相 0.2mol/LNaCl溶液配制的但是测出来的溶剂峰一个是正峰一个是倒峰是不是因为我的流动相的盐浓度过高了

其次我的样品的相对分子质量是80W左右降解后应该在14min之后也会出现几个峰可是它只有在17min19min20min出现三个峰然后17min19min还出现了一种趋势随着辐照剂量的增大它们的保留时间有往前走的趋势我没理解错的话就是分子量逐渐变大了不是很符合辐射降解后分子量越来越小的趋势
小不董
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原文由 王大虎(Ins_c8a84430) 发表:

谢谢您的解答我现有几点疑惑劳烦再问您一下

首先流动相是0.2mol/LNaCl溶液而样品和标准品也是流动相 0.2mol/LNaCl溶液配制的但是测出来的溶剂峰一个是正峰一个是倒峰是不是因为我的流动相的盐浓度过高了

其次我的样品的相对分子质量是80W左右降解后应该在14min之后也会出现几个峰可是它只有在17min19min20min出现三个峰然后17min19min还出现了一种趋势随着辐照剂量的增大它们的保留时间有往前走的趋势我没理解错的话就是分子量逐渐变大了不是很符合辐射降解后分子量越来越小的趋势
那你可以用盐浓度低一点的水溶液来溶解,看是否出现倒峰,或者就用这0.2mol/L的NaCl溶液进一针来确认是否是溶剂峰,这个正峰和倒峰的时间是否一致。
至于你样品被辐射降解后,生产物,要你理解,辐射剂和降解产物的关系。按照GPC分离原理,保留时间越靠前,是分子量越大。其实还有个因素,你样品的浓度问题,是否一致,降解前后样品的信号相应是否一致,检测信号是否和浓度成正比。
王大虎
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原文由 小不董(doxw0323) 发表:
那你可以用盐浓度低一点的水溶液来溶解,看是否出现倒峰,或者就用这0.2mol/L的NaCl溶液进一针来确认是否是溶剂峰,这个正峰和倒峰的时间是否一致。
至于你样品被辐射降解后,生产物,要你理解,辐射剂和降解产物的关系。按照GPC分离原理,保留时间越靠前,是分子量越大。其实还有个因素,你样品的浓度问题,是否一致,降解前后样品的信号相应是否一致,检测信号是否和浓度成正比。
好的,非常感谢您,我再去研究研究!
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