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主题：【分享】【实战宝典】普通PCR出现假阴性结果，不出现扩增条带的可能因素有哪些？

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发表于：2022/07/07 09:16:17 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题描述：普通PCR出现假阴性结果，不出现扩增条带的可能因素有哪些？
解答：
原因需要在PCR反应的关键环节上寻找，如下：

（1）DNA模板中含有杂蛋白质①DNA模板中蛋白质没有消化完全，特别是染色体中的组蛋白；②在提取制备模板时DNA丢失过多；③模板DNA中有过多的酚残留；④模板DNA变性不彻底。

（2）酶失活导致PCR扩增失败，更换新酶重新实验，或着将新旧两种酶同时使用，根据扩增结果分析是否因酶的活性而导致PCR扩增失败。

（3）引物的问题引物合成质量、引物的浓度、上游和下游引物浓度是否对称等，是PCR失败或扩增条带不理想容易弥散的常见原因。有些批次的引物合成质量有问题，上下游引物的浓度与标识的浓度不符，造成低效率的不对称扩增。

（4）Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量，甚至使PCR扩增失败。　　　　

（5）物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度不合适，变性时间短，极有可能出现假阴性。

以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》
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