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可能的原因有：
（1）制胶时要使胶完全融化。
（2）检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。
（3）模板降解或过量，可通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新制备模板。模板的使用量请参考说明书。如果目的条带较长，模板是 cDNA，要确认逆转录所用 RNA 的纯度及完整度，逆转录时不加随机引物重新逆转录。
（4）反应程序不够优化，退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索最佳的退火温度；尝试 Touch Down 程序。
（5）酶量加入过多。
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