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主题：【已应助】关于荧光光度计的信噪比困惑

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Ins_7dd1906e
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发表于：2022/07/30 19:37:19 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近在测试新买的荧光光度计的性能指标时，发现信噪比这个指标比较奇怪。同样是标称S/N p-p 300的设备，在发射和激发带宽10nm、高压800V、积分时间2秒的情况下做水的拉曼峰。打开样品仓，信号会略微上升，确定不溢出。等2-3秒后关上样品仓,新老设备相差比较多。老设备大概3秒左右到达信号稳定，但是新的设备需要6秒左右信号才能稳定下来，都明显超过了设定的积分时间。是我的操作不合理还是我对积分时间的理解有错误？
推荐答案：夕阳回复于2022/08/02
（1）积分时间是指荧光信号开始测量后的采集周期，例如文中2秒的积分时间就是以2秒为一个采样周期（以2秒计算样品信号的积分面积）。
（2）楼主所谓的6秒时间是仪器的稳定时间，这与采样时间没有必然的联系。不过稳定时间越早，反映了仪器的稳定性越好。但是这个稳定时间与各种因素有关。
（3）一般的荧光仪为了避免检测器（光电倍增管）受到外界强光的照射而过早衰老，一般在样品室的上盖打开时，在光入口处均有一个光闸；当样品室打开时，光闸落下即阻止了外界光的射入。当样品室上盖合上（关闭）时，光闸打开。这个一开一合的过程需要仪器有一个延迟时间（稳定的过程）；自然了，这个延迟时间越短越好。但是荧光仪的检测过程不是以仪器上盖闭合为开始测量为起点的，要等到一个短暂的延迟时间后再点击仪器的测量键就保险了。所以楼主的6秒的稳定时间便可作为延迟测量的参考时间。
（4）具体6秒的没延迟时间算不算长？这要因不同型号的仪器而异。但是我主观认为6秒的延迟时间确有些长了。只要仪器预热时间足够，理论上样品仓上盖合上后即可测量，我是用的荧光仪便是如此。
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2022/8/2 7:51:29 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
（1）积分时间是指荧光信号开始测量后的采集周期，例如文中2秒的积分时间就是以2秒为一个采样周期（以2秒计算样品信号的积分面积）。
（2）楼主所谓的6秒时间是仪器的稳定时间，这与采样时间没有必然的联系。不过稳定时间越早，反映了仪器的稳定性越好。但是这个稳定时间与各种因素有关。
（3）一般的荧光仪为了避免检测器（光电倍增管）受到外界强光的照射而过早衰老，一般在样品室的上盖打开时，在光入口处均有一个光闸；当样品室打开时，光闸落下即阻止了外界光的射入。当样品室上盖合上（关闭）时，光闸打开。这个一开一合的过程需要仪器有一个延迟时间（稳定的过程）；自然了，这个延迟时间越短越好。但是荧光仪的检测过程不是以仪器上盖闭合为开始测量为起点的，要等到一个短暂的延迟时间后再点击仪器的测量键就保险了。所以楼主的6秒的稳定时间便可作为延迟测量的参考时间。
（4）具体6秒的没延迟时间算不算长？这要因不同型号的仪器而异。但是我主观认为6秒的延迟时间确有些长了。只要仪器预热时间足够，理论上样品仓上盖合上后即可测量，我是用的荧光仪便是如此。
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2022/8/2 8:28:58 Last edit by anping
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2022/8/8 9:18:58 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
又做了一些相关的测试，新设备的在900V时的稳定曲线大致2秒左右到达稳定性信号的95%左右，但是剩下的5%就非常非常慢了，大致要20~30秒以上。老设备上没有类的问题。
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夕阳
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2022/8/9 9:33:07 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Ins_7dd1906e(Ins_7dd1906e) 发表:
又做了一些相关的测试，新设备的在900V时的稳定曲线大致2秒左右到达稳定性信号的95%左右，但是剩下的5%就非常非常慢了，大致要20~30秒以上。老设备上没有类的问题。
有仪器稳定过程的记录图谱吗？
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Ins_7dd1906e
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2022/8/9 16:54:50 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夕阳(anping) 发表:
有仪器稳定过程的记录图谱吗？
做了时间扫描，是很奇怪的类似于L型的曲线。会有明显的突变
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夕阳
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2022/8/9 18:53:30 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Ins_7dd1906e(Ins_7dd1906e) 发表:
做了时间扫描，是很奇怪的类似于L型的曲线。会有明显的突变
能上传该图谱看看吗？
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