色谱柱保留机制研究

SiO₂-SMA衍生物色谱柱保留机制

SiO₂-SMA衍生物色谱固定相中具有苯环、烷基链、羧基、酰胺基、酯基等基团。其中苯环和烷基链具有较强疏水性，可使固定相具有反相模式分离性能；羧基、酰胺基和酯基与分析物间存在极性相互作用，可使固定相具有亲水模式分离性能。

首先采用疏水性的烷基苯类物质考察了SiO₂-SMA-十二醇色谱柱和SiO₂-SMA-氨基酸色谱柱的保留机制。如图A和图B所示，5种疏水性逐渐增强的烷基苯类物质（苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯）在两种色谱柱上的保留呈增强的趋势；另外，随着流动相中乙腈含量由50%增加到80%，烷基苯类化合物在两种色谱柱上保留均逐渐减弱，表现出典型的反相色谱保留模式。

进一步采用亲水性的酰胺类物质考察了SiO₂-SMA-十二醇色谱柱和SiO₂-SMA-氨基酸色谱柱的保留机制。如图C和图D所示，两种色谱柱在高比例有机相条件下均可实现酰胺类物质的有效分离，且随着流动相中含水量增加对其保留减弱，为典型的亲水作用色谱保留模式。

因此，两种色谱柱均具有反相/亲水混合模式保留机制。另外，从保留因子来看，SiO₂-SMA-十二醇色谱柱对疏水性物质的保留强于SiO₂-SMA-氨基酸色谱柱，而SiO₂-SMA-氨基酸色谱柱对亲水性物质的保留强于SiO₂-SMA-十二醇色谱柱，说明后修饰对于SMAnh的理化性质有较大影响，进而影响了色谱柱的保留行为。

图流动相中乙腈含量对色谱保留的影响

SiO₂-[P_888Allyl]Br色谱柱保留机制

由于SiO₂-[P_888Allyl]Br固定相中含有季膦离子，使得固定相具有较强的亲水性；此外，SiO₂-[P_888Allyl]Br固定相中还含有三条辛基侧链，使得SiO₂-[P_888Allyl]Br固定相具有较强的疏水性。选取五种小分子亲水性核苷/核酸碱基和四种疏水性烷基苯考察SiO₂-[P_888Allyl]Br色谱的保留机制。

首先采用亲水性的核苷/核酸碱基类物质，包括胞嘧啶、胞苷、腺苷、尿嘧啶和尿苷对SiO₂-[P_888Allyl]Br色谱柱的保留机制进行考察。如图a所示，随着洗脱液中H₂O含量从5%增加到50%，胞嘧啶、胞苷、腺苷、尿嘧啶和尿苷的保留因子从3.87迅速下降到0.12，表现出典型的亲水色谱保留机制。进一步选取疏水性不同的苯、乙苯、丙苯、丁苯考察填充SiO₂-[P_888Allyl]Br色谱柱的保留机制。从图b可以看出，当洗脱液中ACN含量从40%增加到90%时，苯、乙苯、丙苯、丁苯的保留呈下降趋势，表现出典型的反相色谱保留机制。因此，SiO₂-[P_888Allyl]Br色谱柱表现出亲水/反相混合模式的保留机制。