主题:【原创】LC-MSMS法同时分析血液中五种免疫抑制剂浓度

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LC-MSMS法同时分析血液中五种免疫抑制剂浓度



1、项目背景:

免疫抑制剂通过抑制淋巴细胞的功能,减少移植物排斥反应的发生,延长移植物存活时间。但由于不良反应较多,常常需要在低剂量发生移植物排斥和高剂量产生毒性之间取得平衡。临床常用的免疫抑制剂如环孢素A(Cyclosporin A)、霉酚酸酯(Mycophenolate mofetil)、他克莫司(Tacrolimus)、西罗莫司(Sirolimus)、依维莫司(Everolimus)等,由于其治疗窗窄,其药动学存在明显的个体间差异,因此需要密切监测药物浓度,以确保处于安全有效的治疗范围。



2、实验部分

2.1 实验仪器


液相色谱质谱检测系统:AB SCIEX Triple QuadTM  4500MD

高速冷冻离心机:D1524R

2.2样本制备

100 μL全血样本,加入100 μL硫酸锌水溶液,再加入300 μL含内标工作液,涡旋混匀1 min,将样品于4 条件下14000 rmp 离心10 min,取200 μL上清于进样小瓶中,进行LC-MSMS分析。

2.3分析方法

Column: ChromCore BR C18 3μm2.1×50mmPart No.A301-030018-02105S

Mobile Phase:A) 0.1%甲酸-2 mM乙酸铵-

B) 甲醇

Gradient:2 min 40% B

Flow Rate:0.7 mL/min 

Temperature:45

Injection:5 μL



3、实验结果

3.1色谱图


,461,

,482,



,482,



,484,

,507,

,507,

3.2标准曲线



霉酚酸(线性范围50~5000 ng/mL)、环孢素A(线性范围10~1000 ng/mL)、他克莫司(线性范围1~100 ng/mL)、依维莫司(线性范围1~100 ng/mL)、西罗莫司(线性范围1~100 ng/mL)在其线性范围内呈现良好的线性关系,r值均在0.99以上。

4、结论

本文建立了全血样本中霉酚酸、他克莫司、依维莫司、西罗莫司、环孢素A五种免疫抑制剂的LC-MSMS测定方法。采用色谱柱ChromCore BR C18分析霉酚酸、他克莫司、依维莫司、西罗莫司、环孢素A,结果显示,目标物保留强,峰形良好,分析时间短,满足日常检测需求。

色谱柱信息:纳谱分析ChromCore BR C18 3μm, 2.1×50mm
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