主题：【第十六届原创】脆弱的凝胶色谱柱

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Ins_a6f61408

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好好学习发表于：2023/08/01 17:05:05 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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脆弱的凝胶色谱柱

单位上最近要做个聚合物，需要用到凝胶色谱柱。该柱子相比常规的C18柱子更为脆弱，这里就按我查询到的信息结合安捷伦培训老师给的建议，说说如何维护用好该柱子。

1. 拿到柱子，先找到它的说明书，这款柱子是Shodex OHpak SB-806M HQ，随柱子并没有提供纸质说明书，需要到网上下载。还好，它有中文网站，说明书也是中文的。一款新柱子，我们需要知道它耐受的体系，耐受压力，耐受pH，流速，压力，温度，保存溶剂等等。这些在说明书里都有体现，如图

图1 保存溶剂为0.02%叠氮化钠水溶液

图2 流速范围，耐受压力，pH和适用温度范围

图3 适用的流动相
2. 确认了基本信息，就可以上机了。过滤超声脱气流动相后，排空。然后取下原有柱子，关闭排空阀，用流动相冲洗管线。这样保证进入柱子的成分都是流动相。对于自动进样器，还需要切换到旁路以冲洗定量环和计量泵。如图

图4
3. 仪器系统冲洗完后，就接上保护柱和柱子，然后开始冲柱子。因为出厂溶剂是水溶液，而我要用的也是水溶液，都是自己人那就直接用流动相冲洗。用一个较小的流速冲洗柱子，按要求需要有3-5倍柱体积的流动相来置换。计算得所需体积为45-75mL。按建议用0.3mL的流速，那就至少需要150min，时间有点长啊。这时候要升柱温，低流速下升柱温。

图6

4. 溶剂切换完成，就可以直接上流速了。因为凝胶色谱柱比较脆弱，不能有大的压力变化，所以需要在泵里设置一个较小的压力梯度，如图。这样在提高流速时，不会哐当一声压力就上去了，而是按设定的速度慢慢上去。图中设置最大流量梯度为1mL/min^2，意思是设置流量增量为1mL时，需要1min才能达到1mL的增量。

图7 流量梯度介绍

图8 设置最大流量梯度

5. 柱子平衡好后，就可以开始进样了，按文献做好设定，就开始干活。然后很快就顺利出峰了，然后就开始设置序列。

6. 不对，还需要一个关机方法，不然在序列跑完后，直接关流速，是不好的。那就需要一个降流速的方法，如图，流速从0.8mL用5min降低到0.3mL，再冲洗20min，用于将柱温。最后再用1min降低到0。这样压力就降得慢，没问题。把这个方法添加到序列表最后，再设置standby，很稳妥。如图

图9

7. 用完后，需要保存柱子。说明书是用出厂溶剂，但是出厂溶剂是剧毒的叠氮化钠的水溶液。这东西不好买，不好管控。柱子官网上想提交问题，但一直提交不成功。随即咨询了安捷伦的培训老师和应用工程师，他们建议是可以纯水保存，然后放冰箱，再每个月拿出来冲洗一次。后来在官网找到了厂家的邮箱，发了邮件咨询，也是可以纯水保存，然后每月冲洗一次。那就这样吧，纯水保存使用也方便，不用过渡。

如有不合适的地方，请各位指正，谢谢。

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