主题：【资料】常用的抗体亲和力成熟技术有哪些？

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发表于：2023/08/17 16:14:56 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

根据体内抗体亲和力成熟原理，在体外抗体亲和力成熟过程中，选择突变区域以及如何引入突变是一个关键问题，目前的突变策略主要分为三大类，随机突变、置换和定向突变。

①易错PCR

易错PCR是目前最常用的抗体突变技术，可以在抗体基因的全长或部分区域随机引入突变。在聚合酶对目的基因扩增时，通过应用错配率高的聚合酶或调整反应条件等，以一定的频率向目的基因中随机引入突变，并通过多轮PCR反复进行随机诱变，累计突变效应，最终获得目的蛋白的随机突变体。

②链置换

链置换是保留某个特定抗体的重链或轻链，另一条链与一个随机化的互补链进行组合，从中筛选更高活性的突变株。通过固定抗体两条链中的一条链，对另一条链构建具有足够多样性的置换文库，随机组合有可能产生最佳链组合，经过噬菌体抗体库筛选可获得高亲和力的新抗体。链置换策略常采用轻链替换。

③定点突变

由于天然抗体在亲和力成熟过程中，体细胞高频突变发生区域并非均匀分布，而是主要集中在与抗原直接接触的CDR区。在抗体的亲和力体外成熟过程中，CDR区是最常选用的定点突变区域，这样既可以获得足够的序列多样性，又不会破坏蛋白质结构。对CDR进行定点突变时，可以对多个CDR进行平行突变或进行逐步优化。

④DNA改组

DNA改组技术是对同源的抗体基因，采用脱氧核糖核酸酶Ⅰ将其切割成不超过50bp的片段，再随机组合后进行PCR扩增成完成的抗体基因的技术。它包含了抗体片段随机化切割、重组和筛选的过程，一定程度上模拟了天然抗体的亲和力成熟过程，并加快了体外定向进化速度。

Tips:

1、在链置换中为什么通常替换的都是轻链？

答：因为抗体重链在抗结合活性和结构方面比较重要，所以链置换策略常采用轻链替换，以尽量避免链替换后抗体结合特异性发生变化。

2、抗体库技术与单、多抗技术相比，有何优劣？

答：优势：抗体库技术筛选范围大、实验周期短、操作简单、不许进行免疫操作、可应用于大规模生产劣势：亲和力弱，不易激发人体的抗原-抗体反应。临床应用受限较大。

义翘神州提供抗体亲和力成熟服务，服务内容及流程可以查看：https://cn.sinobiological.com/services/antibody-affinity-maturation-service