有效磷，是指土壤中可被植物吸收利用的磷的总称。它包括全部水溶性磷、部分吸附态磷、一部分微溶性的无机磷和易矿化的有机磷等，后二者需要经过一定的转化过程后方能被植物直接吸收。化学上，有效磷定义为：能与³²P进行同位素交换的或容易被某些化学试剂提取的磷及土壤溶液中的磷酸盐。

1、基本原理：以0.5mol/L碳酸氢钠(pH 8.5)浸提土壤中的有效磷，使钙离子以碳酸钙的形式沉淀，使活性较大的磷酸钙得以溶解被浸提出来，同时活性的 Fe-P，Al-P 发生水解作用而浸出，本方法适用于中性和石灰性森林土壤中有效磷的测定。

2、主要仪器：可见分光光度计、电子天平、恒温水平震荡仪

3、主要试剂：

碳酸氢钠（分析纯）

二硝基酚（分析纯）

硫酸（分析纯）

盐酸（分析纯）

钼酸铵（分析纯）

酒石酸锑钾（分析纯）

抗坏血酸（分析纯）

磷标准溶液（1000mg/L，市售有证）

钼锑贮存液：取153ml硫酸缓缓加入到400ml水中，搅拌冷却。取10.0g钼酸铵，溶于约60℃的300ml水中，冷却。将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中，再加入100ml 5g/L酒石酸锑钾溶液，最后用水稀释至1L摇匀。

钼锑抗显色剂：称取1.5g抗坏血酸溶于100ml 钼锑贮存液中，现用现配。

4、样品的制备：

将土壤弄碎铺在干净的牛皮纸上，放在通风阴凉处晾干。晾干后进行研磨，研磨后进行过10目筛。

称取过10目的风干土样2.50g于浸提瓶中，加50.0mL0.5mol/L碳酸氢钠溶液，在20℃恒温条件下 160 r/min 振荡30min，过滤，待测。同时做空白实验。

5、标准曲线：

磷标准溶液（1000mg/L）经逐级稀释成5mg/L磷标准使用液，取磷标准使用液0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00mL、4.00 mL、5.00 mL、6.00mL于 50 mL 容量瓶中，再分别加入与待测溶液等量的碳酸氢钠浸提剂，加1 滴二硝基酚指示剂（0.2%），然后用0.5 mol/L 硫酸溶液调pH到溶液刚呈微黄色，准确加人5.0mL钼锑抗显色剂，用水定容到刻度，摇匀，即得0.00mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.30mg/L、0.40 mg/L，0.50mg/L，0.60 mg/L磷标准系列显色液。在室温高于20℃条件下静置30min，在分光光度计上用 700 nm波长，以0.00mg/L标准溶液为参比溶液调节仪器零点，绘制标准曲线。

有效磷标准曲线

编号	0	1	2	3	4	5	6
标准使用液（mg/L）	5.00
标准使用液加入体积mL	0.00	1.00	2.00	3.00	4.00	5.00	6.00
浓度值（mg/L）	0.00	0.10	0.20	0.30	0.40	0.50	0.60
定容体积V	50	50	50	50	50	50	50
吸光度A	0.000	0.067	0.145	0.215	0.286	0.365	0.436

6、试样的测定：吸取待测液5mL于50mL容量瓶中，加1滴二硝基酚指示剂，然后用0.5mol/L硫酸溶液调pH到溶液刚呈微黄色，等待气泡完全溢出后准确加人5.0 mL钼锑抗显色剂，用水定容到刻度，摇匀，在室温（27.5℃）条件下静置30min，在分光光度计上用700nm波长比色，获得待测液的磷浓度(mg/L)。

7、计算：

W=（C-C0）×V×t÷m÷k

式中：W-有效磷含量，mg/kg；C-样品的磷浓度，mg/L；C0-空白的磷浓度，mg/L；V-显色液体积，50ml；t-分取倍数，10；m-土壤称量质量，g；k-土壤干物质含量。

8、检测结果：

样品编号		结果（mg/kg）	平均值（mg/kg）	相对标准偏差（%）
1号	平行-1	6.38	5.93	8.2
	平行-2	6.00
	平行-3	5.42
2号	平行-1	10.71	10.10	5.5
	平行-2	9.63
	平行-3	9.96
3号	平行-1	16.15	14.97	6.9
	平行-2	14.56
	平行-3	14.21