提取：由于16种真菌毒素的物理化学性质差异大以及茶叶不同类别基质不同，对常见的提取剂乙腈、甲醇进行试验，用加标回收的方式考察提取效果，综合考虑，选用乙腈作为提取液，选择性和渗透性都好，而且容易进入茶叶组织内，不容易萃取出蜡类、脂肪酸等杂质，有效减少干扰成分，提取回收率高。在提取过程中加NaCl 有利于真菌毒素向乙腈相中转移。常见提取方式有涡旋震荡提取、超声提取、索式提取、加速溶剂萃取、基质分散提取，经比较对比：索式提取回流时间在8-16h，有机溶剂消耗量，人力和经济成本较高。加速溶剂萃取要有专门提取仪器，采用涡旋震荡提取和超声提取效果最好，如两者结合用提取效率没有明显差异，为节约时间、简化操作选涡旋震荡提取。

净化：常用的过柱净化如免疫亲和层析柱、多功能净化柱和固相萃取柱。前者大多只能用于特定真菌毒素的测定。后2种也很难满足茶叶中16种毒素的同时净化。针对茶叶基质样品中所含的大量脂类、蛋白类、糖类、色素等干扰杂质，本试验选用分散固相萃取，对常用的净化剂 C18、GCB、PSA 等试验净化效果，GCB吸附谱较广，去除色素效果明显，PSA去除极性基质，C18吸附非极性到中等极性化合物，除脂效果较好，采用加入C18 粉末、PSA 粉末、GCB、无水硫酸镁进行净化，经比较其用量，增加净化剂用量会导致目标物被吸附，回收率低，量少则导致净化效果降低，综合考虑，选用加入C18 粉末50 mg 、PSA 粉末100mg 、GCB100mg 、无水硫酸镁50 mg，优化后提取回收率改善，提取回收率在70.1%～105.6%之间，净化效果最好。由于茶叶色素很重，除色素很关键，加入甲苯1mL ，有助于除平面结构色素，加入甲酸300μL 以平衡GCB碱性。

16种待测物在相应的线性范围内线性关系良好，r 均大于 0.9900；分别选取绿茶、红茶、黑茶等3种不同基质空白样品加入适量16种真菌毒素混合标准溶液，用与样品相同的分析方法，以信噪比(S/N)为3时对应的加标量计算方法检出限为0.05 μg/kg～5.0 μg/kg，以信噪比(S/N)为10时对应的加标量计算方法定量限为0.15 μg/kg～15.0 μg/kg，结果见表1。

表1 16种真菌毒素在不同茶叶品种中的相关系数、基质效应（ME)与检出限和定量限

化合物	线性范围 (ng/ml)	相关系数ｒ	红茶			黑茶				绿茶
化合物	线性范围 (ng/ml)	相关系数ｒ	LOD (μg/kg)	LOQ (μg/kg)	ME (%)		LOD (μg/kg)	LOQ (μg/kg)	ME (%)		LOD (μg/kg)	LOQ (μg/kg)	ME (%)
DON	1.0～100.0	0.9999	2.0	6.0	25.3		2.0	6.0	19.1		2.0	6.0	14.8
3-ADON	5.0～100.0	0.9996	1.0	3.0	32.0		1.0	3.0	31.6		1.0	3.0	23.7
15-ADON	5.0～100.0	0.9989	1.0	3.0	39.9		1.0	3.0	28.1		1.0	3.0	18.1
NIV	5.0～100.0	0.9997	5.0	15.0	30.9		5.0	15.0	37.9		5.0	15.0	33.3
ZEN	0.5～20.0	0.9990	1.0	3.0	16.2		1.0	3.0	35.6		1.0	3.0	18.9
AFB₁	0.05～2.0	0.9998	0.05	0.15	16.9		0.05	0.15	18.8		0.05	0.15	14.8
AFB₂	0.05～2.0	0.9997	0.1	0.3	19.1		0.1	0.3	32.9		0.1	0.3	23.5
AFG₁	0.05～2.0	0.9993	0.05	0.15	23.2		0.05	0.15	24.1		0.05	0.15	20.5
AFG₂	0.05～2.0	0.9999	0.1	0.3	30.5		0.1	0.3	35.3		0.1	0.3	26.5
FB₁	0.1～4.0	0.9997	0.2	0.6	20.6		0.2	0.6	33.6		0.2	0.6	25.6
FB₂	0.1～4.0	0.9996	0.5	1.5	30.9		0.5	1.5	32.4		0.5	1.5	31.2
FB₃	0.1～4.0	0.9986	0.5	1.5	30.8		0.5	1.5	37.9		0.5	1.5	31.8
OTA	0.05～2.0	0.9992	0.1	0.3	19.7		0.1	0.3	18.9		0.1	0.3	49.0
T-2	0.5～20.0	0.9991	0.2	0.6	65.3		0.2	0.6	69.5		0.2	0.6	70.6
HT-2	1.0～40.0	0.9999	0.2	0.6	28.6		0.2	0.6	33.1		0.2	0.6	29.6
ST	0.05～2.0	0.9992	1.0	3.0	19.5		1.0	3	21.5		1.0	3.0	15.7