主题：【资料】gst标签蛋白大小、工作原理及使用注意事项

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发表于：2023/11/09 14:58:29 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

GST标签由211个氨基酸组成，大小约为26KDa。一般利用重组DNA技术插入到目的蛋白的C末端或N末端（大肠杆菌中常用在N端），再利用相应的抗GST标签抗体进行鉴定和检测，广泛应用于重组蛋白表达以及亲和纯化实验中。

氨基酸序列

MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKSD

DNA序列（基于pGEX-4T1载体）

ATG TCCCCTATAC TAGGTTATTG GAAAATTAAGGGCCTTGTGC AACCCACTCG ACTTCTTTTGGAATATCTTG AAGAAAAATA TGAAGAGCATTTGTATGAGC GCGATGAAGG TGATAAATGGCGAAACAAAA AGTTTGAATT GGGTTTGGAGTTTCCCAATC TTCCTTATTA TATTGATGGTGATGTTAAAT TAACACAGTC TATGGCCATCATACGTTATA TAGCTGACAA GCACAACATGTTGGGTGGTT GTCCAAAAGA GCGTGCAGAGATTTCAATGC TTGAAGGAGC GGTTTTGGATATTAGATACG GTGTTTCGAG AATTGCATATAGTAAAGACT TTGAAACTCT CAAAGTTGATTTTCTTAGCA AGCTACCTGA AATGCTGAAAATGTTCGAAG ATCGTTTATG TCATAAAACATATTTAAATG GTGATCATGT AACCCATCCTGACTTCATGT TGTATGACGC TCTTGATGTTGTTTTATACA TGGACCCAAT GTGCCTGGATGCGTTCCCAA AATTAGTTTG TTTTAAAAAACGTATTGAAG CTATCCCACA AATTGATAAGTACTTGAAAT CCAGCAAGTA TATAGCATGGCCTTTGCAGG GCTGGCAAGC CACGTTTGGTGGTGGCGACC ATCCTCCAAA ATCGGATCTGGTTCCGCGTG GATCCCCGGA ATTCCCGGGTCGACTCGAGC GGCCGCATCG TGACTGA

GST标签作用机理

① 应用于原核表达；

● 作为一种高度可溶的蛋白，能增加外源蛋白的可溶性

● 在大肠杆菌中大量表达，起到提高表达量的作用

② GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性；

③ GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂（如：盐酸胍或尿素等）；

④ GST融合蛋白已经成为分子生物学领域的基本工具，其广泛用于研究蛋白质-DNA及蛋白质-蛋白质间的相互作用，也可作为抗原用于免疫学或疫苗的研究。

GST标签蛋白注意事项

① 当融合GST序列的表达载体表达时，部分截短的蛋白产物很容易聚集，可能的原因为：

GST标签二聚化

GST标签与目标蛋白之间存在内在易断的连接区域

融合蛋白的mRNA与核糖体结合不稳定共同造成

② GST二聚体的每一个亚基含有4个暴露的半胱氨酸残基，会导致很明显的氧化性聚合；

③ 相对于小分子的短肽标签，GST标签融合表达时，需要更多的代谢能量，增加了细胞代谢的负担；

④ GST标签与谷胱甘肽琼脂糖树脂的结合很慢，大规模纯化时需要更多的时间上样；

⑤ GST标签融合蛋白的分子量可能会影响亲和树脂的载量，导致80kDa以上的大分子蛋白质纯化回收率较低。

更多详情可以查看义翘神州GST标签蛋白纯化https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression