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液相色谱（LC）

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主题：【已应助】正相液相色谱仪和反相液相色谱仪在机器上有什么差别？

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l4352

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发表于：2024/02/05 17:09:16 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

有哪些不一样

推荐答案：123回复于2024/02/05

正相色谱和反相色谱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。

正相色谱：采用极性键合固定相，硅胶表面键合的是极性的有机基团，键合相的名称由键合上去的基团而定。最流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂，如烃类溶剂，或其中加入一定量的极性溶剂(如氯仿、醇、乙腈等)，以调节流动相的洗脱强度。分离机制属于分配色谱：组分的分配比K值，随其极性的增加而增大，但随流动相中极性调节剂的极性增大(或浓度增大)而降低。同时，极性键合相的极性越大，组分的保留值越大。该法主要用于分离异构体，极性不同的化合物，特别是用来分离不同类型的化合物。分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

反相色谱：用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

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2024/2/5 17:19:02 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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ztyzb

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2024/2/5 20:55:55 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主，正相色谱仪和反向色谱仪主要就是色谱柱的区别。
液相色谱仪按固定相和流动相的极性不同可分为正相液相色谱仪(NPC)和反相液相色谱仪(RPC)。如果采用极性固定相和相对非极性流动相，就称为正相；如果采用相对非极性固定相和极性流动相，则称为反相。由于极性化合物更容易被极性固定相所保留，所以正相液-液色谱系统一般可用于分离极性化合物。相反，反相液-液色谱系统一般可用于分离非极性或弱极性化合物。正相色谱的流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出；反相色谱的流出顺序正好相反。另外，其他有些色谱如柱色谱也有正反相之分。

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ppttmmyy

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2024/2/6 0:13:41 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

两相极性差异不同

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JOE HUI

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2024/2/6 11:51:43 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

液相色谱仪正相与反相区别在液相色谱仪分析中，根据流动相和固定相相对极性的不同，可分为正相色谱和反相色谱。所谓正相色谱是指固定相极性大于流动相极性的情况，反之，固定相的极性小于流动相的极性，则称为反相色谱。
　　由于极性化合物更容易被极性固定相所保留，所以正相色谱系统一般适用于分离极性化合物，极性小的组分先流出。相反，反相色谱系统一般适用于分离非极性或弱极性化合物，极性大的组分先流出。因此在应用上，正相色谱用于分离极性较大的物质，如蛋白质、生物碱等。反相色谱多用于分离极性较小的物质，在流动相的选择上，反相色谱的优势更大，在实际工作中反相色谱的应用更为广泛。
　　正相色谱用的固定相通常为硅胶，以及其他具有极性官能团，如胺基团和氰基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性弱的组份先被冲洗出色谱柱。
　　反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。
　　反相液相色谱柱效高、分离能力强、保留机理清楚，是液相色谱分离模式中使用为广泛的一种，对于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析，反相液相色谱正受到越来越多的关注。反相色谱法是以表面非极性载体为固定相，以比固定相极性强的溶剂为流动相的一种液相色谱分离模式。反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离。在生物大分子分离中，多采用离子强度较低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相。普通的反相色谱固定相和孔径大于300?的硅胶键合烷基固定相应用较为普遍，聚合物基质的反相色谱固定相也有较多应用。

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